1
Доступно поисковых запросов: 1 из 2
Следующий пробный период начнётся: 02 октября 2022 в 10:57
Снять ограничение

ГОСТ 33774-2016

Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Острая токсичность для эмбрионов рыбы
Действующий стандарт
Проверено:  24.09.2022

Информация

Название Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Острая токсичность для эмбрионов рыбы
Дата актуализации текста 01.01.2021
Дата актуализации описания 01.01.2021
Дата издания 12.08.2016
Дата введения в действие 01.03.2017
Область и условия применения Настоящий стандарт устанавливает метод определения острой токсичности для эмбрионов рыбы (FET) с использованием данио-рерио (Danio rerio). Данный метод предназначен для определения острой токсичности химических веществ на эмбриональных стадиях развития рыбы
Опубликован Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2016 год
Утверждён в Росстандарт


ГОСТ 33774-2016

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ



МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ



Острая токсичность для эмбрионов рыбы



Testing of chemicals of environmental hazard. Fish embryo acute toxicity (FET)

     
МКС 13.020.01

Дата введения 2017-03-01

     

Предисловие


Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Ассоциацией "Некоммерческое партнерство "Координационно-информационный центр государств - участников СНГ по сближению регуляторных практик" (Ассоциация "НП КИЦ СНГ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 апреля 2016 г. N 87-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ISO 3166) 004-97

Код страны по
МК (ISO 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 июня 2016 г. N 756-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33774-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 марта 2017 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD Test N 236:2013 "Острая токсичность для эмбрионов рыбы" ("Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test", MOD) путем изменения структуры. Сравнение структуры международного документа со структурой настоящего стандарта приведено в дополнительном приложении ДА.

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.


Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

Перевод с английского языка (en)

Степень соответствия - модифицированная (MOD)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

Введение


Метод FET основан на результатах исследований и процедур по валидации, выполненных на данио-рерио [1]-[14]. Метод FET может успешно применяться для широкого ряда веществ, обладающих различными механизмами действия, растворимостью, летучестью и гидрофобностью (см. [15] и [16]).

     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает метод определения острой токсичности для эмбрионов рыбы (FET) с использованием данио-рерио (Danio rerio). Данный метод предназначен для определения острой токсичности химических веществ на эмбриональных стадиях развития рыбы.

     2 Термины и определения


В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями:

2.1 основная конечная точка (apical endpoint): Вызывающая эффект на уровне популяции.

2.2 бластула (blastula): Клеточное образование вокруг анимального полюса, которое покрывает определенную часть желтка.

2.3 эпиболия (epiboly): Массивная пролиферация преимущественно эпидермальных клеток в фазе гаструляции эмбрионов и их перемещение из дорсальной к вентральной стороне, посредством чего клетки энтодермального слоя интернализуются в процессах, подобных инвагинации, и желток включается в эмбрион.

2.4 проточный (динамический) тест (flow-through test): Испытание с непрерывным потоком испытуемых растворов через тест-систему во время воздействия.

2.5 внутренний контроль планшета (internal plate control): Внутренний контроль, состоящий из 4 лунок, заполненных водой для разведения, в 24-луночном планшете для идентификации потенциального загрязнения планшетов изготовителем или исследователем во время процедуры и любого возможного эффекта планшета, который может оказывать влияние на результаты испытания.

2.6 ИЮПАК (IUPAC): Международный союз теоретической и прикладной химии.

2.7 вода для поддержания (maintenance water): Вода, в которой разводится взрослая рыба.

2.8 средняя летальная концентрация (LC) (median lethal concentration): Концентрация испытуемого вещества, которая вызывает гибель 50% испытуемых организмов во время испытания.

2.9 полустатическое испытание с обновлением (semi-static renewal test): Испытание с регулярным обновлением испытуемых растворов после определенных периодов времени (например, каждые 24 ч).

2.10 SMILES (Simplified Molecular Input Line Entry Specification): Спецификация упрощенного представления молекул в строке ввода.

2.11 сомит (somite): У развивающихся эмбрионов позвоночных сомиты представляют собой массы мезодермы, распределенные в радиальном направлении к нервной трубке, которые в конечном итоге превращаются в дерму (дерматому), скелетные мышцы (миотом) и позвонки (склеротом).

2.12 статическое испытание (static test): Испытание, в котором испытуемые растворы остаются неизменными в течение всего испытания.

2.13 UVCB: Вещества с неопределенным и переменным составом, продукты сложных реакций или биологические материалы.

     3 Принцип метода


Только что оплодотворенную икру данио-рерио подвергают воздействию испытуемого вещества в течение 96 ч. Каждые 24 ч проводят не менее четырех основных наблюдений в отношении показателей гибели [6]:

1) коагуляция оплодотворенной икры;

2) отсутствие образования сомитов;

3) отсутствие отделения хвостовой почки от желтка;

4) отсутствие сердцебиения.

В конце периода воздействия определяют острую токсичность на основе положительного результата, полученного в любом из четырех зарегистрированных основных наблюдений, и рассчитывают LC.

     4 Предварительные условия

4.1 Полезная информация о свойствах конкретного вещества включает структурную формулу, молекулярную массу, чистоту, стабильность в воде и на свету, значения рК и K, растворимость в воде и давление паров, а также результаты испытания на полную биоразлагаемость ([17] или [18]). Растворимость и давление паров можно использовать для вычисления постоянной закона Генри, которая указывает, могут ли возникнуть потери за счет испарения испытуемого вещества. Должен быть в наличии надежный аналитический метод количественного определения вещества в испытуемых растворах с известной и подтвержденной точностью и пределом обнаружения.

4.2 Если настоящий стандарт используют для испытания смеси химических веществ, то необходимо охарактеризовать ее состав, насколько это возможно, например химической идентификацией ее составляющих компонентов, их количественным содержанием и свойствами этих конкретных веществ (см. 4.1). Перед использованием настоящего стандарта для испытания смеси с последующим представлением результатов в регулирующие органы следует учитывать возможность обеспечения приемлемых результатов для определенной регулирующими органами цели.

4.3 В отношении веществ, которые могут активироваться в результате метаболизма, существуют сведения о том, что эмбрионы данио-рерио обладают способностью к биотрансформации химических соединений [19]-[22]. Однако метаболический потенциал эмбрионов рыбы не всегда аналогичен таковому у неполовозрелых или взрослых рыб. Например, протоксикант аллиловый спирт [9] был пропущен во время проведения FET. Следовательно, если имеются какие-либо обоснованные доказательства того, что метаболиты или другие продукты трансформации могут быть более токсичными, чем исходное соединение, то также рекомендуется проводить испытание таких метаболитов/продуктов трансформации и также использовать полученные результаты при подготовке заключения о токсичности испытуемого химического вещества, или альтернативно провести другое испытание, в котором будет учитываться его метаболизм.

4.4 Для веществ с молекулярной массой 3 kDa, т.е. очень объемных молекулярных структур, и веществ, вызывающих задержку вылупления яиц, которые могут элиминировать или уменьшать воздействие после вылупления яиц, эмбрионы, как ожидают, не будут чувствительны за счет ограниченной биодоступности вещества, и для таких веществ используют более подходящие другие протоколы испытания на токсичность.

     5 Достоверность испытания


Для испытания используют следующие критерии достоверности:

а) общий уровень оплодотворения всех собранных яиц должен составлять 70% в испытуемой партии;

б) температура воды в испытательных камерах должна поддерживаться на уровне (26±1)°С в течение всего испытания;

в) общая выживаемость эмбрионов в отрицательном контроле (в воде для разведения) и в некоторых случаях в контроле на растворитель должна составлять 90% до окончания 96-часового воздействия;

г) воздействие в положительном контроле (например, 3,4-дихлоранилина в концентрации 4,0 мг/л для данио-рерио) должно приводить к минимальной гибели на уровне 30% по окончании 96-часового воздействия;

д) уровень вылупления в отрицательном контроле (и в контроле на растворитель, если он используется) должен составлять 80% по окончании 96-часового воздействия;

е) по окончании 96-часового воздействия концентрация растворенного кислорода в отрицательном контроле и самая высокая испытуемая концентрация должны составлять 80% от насыщения.

     6 Описание метода


Описание рекомендуемых условий содержания и испытания приведено в приложении А.

     6.1 Оборудование


Требуется следующее оборудование:

а) контейнеры для рыбы из химически инертного материала (например, стекла) и соответствующей вместимости с учетом рекомендуемой нагрузки (см. 6.5);

б) инвертационный микроскоп и/или бинокуляр с 80-кратным увеличением. Если в помещении, используемом для проведения наблюдений, невозможно установить температуру на уровне (26±1)°С, то необходимо поддерживать температуру стадией перекрестного изменения с регулировкой температуры или другими способами;

в) испытательные камеры, например, стандартные 24-луночные планшеты с глубиной примерно 20 мм (см. 6.2);

г) например, самоклеящаяся пленка для покрытия 24-луночных планшетов;

д) термостат или помещение с кондиционируемым воздухом с регулируемой температурой для поддержания температуры на уровне (26±1)°C в лунках (или испытательных камерах);

е) рН-метр;

ж) оксиметр;

и) оборудование для определения жесткости и проводимости воды;

к) нерестовая ловушка: инструментальный лоток из стекла, нержавеющей стали или других инертных материалов; проволочная сетка (размер отверстий (2±0,5) мм) из нержавеющей стали или другого инертного материала для защиты икринок после кладки; нерестовый субстрат (например, имитация растений из инертного материала) (приложение 4а [23]);

л) пипетки с широкими отверстиями для сбора икринок;

м) стеклянные сосуды для приготовления различных испытуемых концентраций и воды для разведения (стаканы, мерные колбы, мерные цилиндры и мерные пипетки) или отбора икринок данио-рерио (например, стаканы, кристаллизационные чашки);

н) если для проведения испытания используют альтернативные системы воздействия, такие как проточные [24] или с пассивным дозированием [25], то требуются соответствующие условия и оборудование.

     6.2 Испытательные камеры


Используют стеклянные или полистироловые испытательные камеры (например, 24-луночные планшеты с вместимостью для заполнения 2,5-5 мл на лунку). В том случае, если предполагается наличие адсорбции испытуемого химического вещества на полистироле (например, это касается неполярных, планарных соединений с высоким K), используют инертные материалы (стекло) для снижения потерь за счет адсорбции [26]. Испытательные камеры располагают в термостате произвольно.

     6.3 Вода и условия испытания


Разведение водой для поддержания рекомендуется для достижения уровня жесткости, характерного для широкого ряда поверхностных вод. Воду для разведения следует получать из восстановленной воды [27]. Полученная степень жесткости должна быть эквивалентна 100-300 мг/л CaCO для предупреждения чрезмерного осаждения карбоната кальция. Можно использовать другую хорошо охарактеризованную поверхностную или родниковую воду. Восстановленную воду можно адаптировать к технической воде с низкой жесткостью разведением деионизированной водой в соотношении 1:5 с обеспечением минимальной жесткости 30-35 мг/л CaCO. Воду аэрируют для насыщения кислородом перед добавлением испытуемого вещества. Температура в лунках должна поддерживаться на уровне (26±1)°C в течение всего испытания. Значение рН должно находиться в диапазоне от рН 6,5 до 8,5 и не изменяться в пределах этого диапазона более чем на 1,5 единицы во время испытания. Если предполагается, что значение рН не будет находиться в данном диапазоне, то доведение рН проводят до начала испытания. Доведение рН проводят таким образом, чтобы существенно не изменялась концентрация стокового раствора и чтобы не была спровоцирована химическая реакция или осаждение испытуемого вещества. Рекомендуется использовать соляную кислоту (HCl) и гидроксид натрия (NaOH) для доведения рН в растворах, содержащих испытуемое вещество.

     6.4 Испытуемые растворы


Испытуемые растворы с выбранными концентрациями можно приготовить, например, разведением стокового раствора. Стоковые растворы предпочтительно готовят простым смешиванием или перемешиванием испытуемого вещества в воде для разведения с использованием механических средств (например, мешалки и/или обработкой ультразвуком). Если испытуемое химическое вещество трудно растворимо в воде, то следует придерживаться процедур, описанных в Руководстве по работе с веществами, с которыми трудно проводить манипуляции [28]. Следует избегать использования растворителей, но в некоторых случаях их применяют для получения достаточно концентрированного стокового раствора. Если растворитель используется для облегчения приготовления стокового раствора, то его конечная концентрация не должна превышать 100 мкл/л и должна быть одинаковой во всех испытуемых сосудах. При использовании растворителя требуется включить дополнительный контроль на растворитель.

     6.5 Содержание родительского стада рыб


Для яйцекладки используют родительское стадо, не подвергавшееся какому-либо воздействию, данио-рерио дикого типа с хорошо известным уровнем продукции икры. У рыбы должны отсутствовать внешние симптомы инфекций и заболеваний, и рыба не должна подвергаться обработке фармацевтическими препаратами (в лечебных или профилактических целях) за два месяца до нереста. Разведение рыбы в аквариумах проводится с рекомендуемым уровнем загрузки из расчета 1 л воды на рыбу и установленным 12-16-часовым световым периодом [29]-[33]. Следует отрегулировать оптимальную скорость фильтрации; необходимо избегать избыточной скорости фильтрации, что может вызвать сильное возмущение воды. Режим кормления см. в приложение А. Следует избегать избыточного кормления, регулярно контролировать качество и чистоту воды в аквариумах и при необходимости приводить в исходное состояние.

     6.6 Подтверждение квалификации


В качестве стандартного вещества испытывают 3,4-дихлоранилин (использованный в испытаниях по валидации [1], [2]) по всему диапазону зависимости "концентрация-эффект" для проверки чувствительности используемого штамма рыбы предпочтительно два раза в год. В каждой лаборатории перед первоначальной постановкой испытания используют стандартное химическое вещество. Лаборатория может использовать это химическое вещество для подтверждения своей технической компетентности в выполнении испытания до представления результатов регулирующим органам.

     6.7 Яйцекладка

6.7.1 Икра данио-рерио может быть получена с использованием нерестовых групп (в отдельных резервуарах для нереста) или с использованием массового нереста (в технических резервуарах). В случае нерестовых групп самцов и самок (например, в соотношении 2:1) в родительской группе помещают в резервуары для нереста за несколько часов до наступления темноты за день до испытания. Поскольку нерестовые группы данио-рерио иногда могут не нереститься, рекомендуется использовать параллельно не менее трех резервуаров для нереста. Для предупреждения генетических изменений икру собирают минимум из трех родительских групп, смешивают и произвольно отбирают.

6.7.2 Для сбора икры нерестовые ловушки помещают в резервуары для нереста или технические резервуары до наступления темноты за день до испытания или до появления света в день испытания. Для предупреждения поедания икры взрослыми особями данио-рерио нерестовые ловушки покрывают инертной проволочной сеткой с соответствующим размером отверстий [примерно (2±0,5) мм]. При необходимости искусственные растения из инертного материала (например, из пластика или стекла) можно прикрепить к сетке в качестве стимула для нереста [3]-[5], [23], [35]. Для этих целей используют атмосферостойкие пластиковые материалы, которые не выщелачиваются (например, фталаты). Спаривание, нерест и оплодотворение проходят в течение 30 мин после появления света, и нерестовые ловушки с собранной икрой осторожно удаляют. Рекомендуется промыть икру восстановленной водой после сбора из нерестовых ловушек.

     6.8 Дифференциация икры


При 26°С оплодотворенная икра подвергается первому делению примерно через 15 мин, и в результате последовательных синхронных делений образуются 4-, 8-, 16- и 32-клеточные бластомеры (приложение Б, [35]). На этих стадиях оплодотворенную икру можно четко идентифицировать по развитию бластулы.

     7 Проведение испытания

     7.1 Условия воздействия


Двадцать эмбрионов на каждую концентрацию (один эмбрион на лунку) подвергают воздействию испытуемого вещества. Воздействие должно быть таким, чтобы ±20% от номинальной концентрации химического вещества поддерживалось на протяжении всего испытания. Если этого невозможно достичь в статической системе, то используют контролируемые полустатические системы, обновляемые через определенные интервалы (например, обновление каждые 24 ч). В этих случаях концентрации, использованные для воздействия, проверяют как минимум для самой высокой и самой низкой испытуемых концентраций в начале и в конце каждого интервала воздействия (см. 7.7.2). Если концентрация воздействия, составляющая ±20% от номинальной концентрации, не может быть обеспечена, то проверяют все концентрации в начале и в конце каждого интервала воздействия (см. 7.7.2). При обновлении следует соблюдать осторожность, чтобы эмбрионы оставались покрытыми небольшим количеством "старых" испытуемых растворов для предупреждения высыхания. Дизайн испытания можно адаптировать, чтобы он соответствовал требованиям испытания конкретных веществ (например, проточные системы [24] или системы с пассивным дозированием [25] для легко деградируемых или высоко адсорбирующихся веществ [29] или для летучих веществ [36], [37]). В любом случае следует проявлять осторожность для минимизации любого стресса для эмбрионов. Испытательные камеры выдерживают в течение не менее 24 ч с испытуемыми растворами до начала испытания. Условия испытаний приведены в приложении А.

     7.2 Испытуемые концентрации

Закупки не найдены
Свободные
Р
Заблокированные
Р
Роль в компании Пользователь

Для продолжения необходимо войти в систему

После входа Вам также будет доступно:
  • Автоматическая проверка недействующих стандартов в закупке
  • Создание шаблона поиска
  • Добавление закупок в Избранное