Внимание! В период с 29.07.22 по 07.08.22 сервис будет находиться в режиме технического обслуживания. В этой связи может наблюдаться нестабильная работа. Приносим извинения за неудобства.
1
Доступно поисковых запросов: 1 из 2
Следующий пробный период начнётся: 15 августа 2022 в 03:50
Снять ограничение

ГОСТ 34108-2017

Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания микотоксинов прямым твердофазным конкурентным иммуноферментным методом
Недействующий стандарт
Проверено:  07.08.2022

Информация

Название Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания микотоксинов прямым твердофазным конкурентным иммуноферментным методом
Название английское Feeds, mixed feeds and raw material. Determination of mycotoxins content by direct solid-phase competitive immunoenzymatic method
Дата актуализации текста 01.01.2022
Дата актуализации описания 01.01.2022
Дата издания 28.08.2020
Дата введения в действие 01.01.2019
Область и условия применения Настоящий стандарт устанавливает прямой твердофазный конкурентный иммуноферментный метод (далее - ИФА) определения содержания микотоксинов: суммы афлатоксинов В1, В2, G1, G2 (по афлатоксину В1), афлатоксина В1, дезоксиниваленола (далее - ДОН), зеараленона, охратоксина А, Т-2 токсина, суммы фумонизинов (по фумонизину В1) в кормах, комбикормах и комбикормовом сырье. Данный метод не распространяется на продукцию минерального происхождения и органического синтеза
Опубликован Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2020
Утверждён в Росстандарт


ГОСТ 34108-2017

     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Определение содержания микотоксинов прямым твердофазным конкурентным иммуноферментным методом

Feeds, mixed feeds and raw material. Determination of mycotoxins content by direct solid-phase competitive immunoenzymatic method



МКС 65.120

Дата введения 2019-01-01

     

Предисловие


Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (АО "ВНИИКП"), Обществом с ограниченной ответственностью "ЗИП-И" (ООО "ЗИП-И")

2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы"

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 июня 2017 г. N 51)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 15 сентября 2017 г. N 1137-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34108-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2019 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июнь 2020 г.


Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
     

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 01.09.2021 N 908-ст c 01.01.2022

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 12, 2021

     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает прямой твердофазный конкурентный иммуноферментный метод (далее - ИФА) определения содержания микотоксинов: суммы афлатоксинов , , , (по афлатоксину ), афлатоксина , дезоксиниваленола (далее - ДОН), зеараленона, охратоксина А, Т-2 токсина, суммы фумонизинов (по фумонизину ) в кормах, комбикормах и комбикормовом сырье.

Данный метод не распространяется на продукцию минерального происхождения и органического синтеза.

Диапазоны измерений приведены в таблице 4.

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты.

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.007.0 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709* Вода дистиллированная. Технические условия

________________

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018.


ГОСТ 6995 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 13586.3 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13979.0 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, сановные параметры и размеры

ГОСТ 21669* Комбикорма. Термины и определения

________________

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 51848-2001 "Продукция комбикормовая. Термины и определения".


ГОСТ 28311 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 29169 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ ISO 6498 Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний

ГОСТ ИСО 5725-1-2003** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения.

________________

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".


ГОСТ ИСО 5725-6-2003*** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

________________

*** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".


Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.


(Измененная редакция, Изм. N 1).

     3 Термины и определения

3.1 В настоящем стандарте применены термины и определения по ГОСТ 21669, ГОСТ ISO 6498, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реактивов и составных частей, предназначенных для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2 основной раствор: Раствор реактива, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других растворов.

     4 Сущность метода


Сущность метода заключается в извлечении микотоксинов из проб экстрагентом, проведении в ячейках планшета реакции, в результате которой образуются окрашенные комплексы, добавлении останавливающего реактива, измерении значений оптической плотности и вычислении результатов.

Для определения микотоксинов используют один из двух вариантов тест-систем.

Метод с использованием тест-системы N 1 с двумя планшетами предусматривает смешивание конъюгата и экстрактов проб или градуировочных растворов в первом планшете и проведение реакции во втором планшете с нанесенными (иммобилизованными) на поверхность ячеек планшета специфичными антителами (далее - АТ), после инкубации и отмывки носителя от несвязавшихся компонентов вносят субстрат, в результате реакции с которым образуются окрашенные комплексы.

Метод с использованием тест-системы N 2 с одним планшетом предусматривает дозирование экстрактов проб или градуировочных растворов, конъюгата и специфичных АТ в лунки планшета с иммобилизованными неспецифичными АТ. После инкубации и отмывки носителя от несвязавшихся компонентов вносят субстрат, в результате реакции с которым образуются окрашенные комплексы.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

     5 Требования безопасности

5.1 При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроприборами по ГОСТ 12.1.019 и ГОСТ 12.2.007.0, требования, изложенные в технической документации на используемые приборы.

5.2 Работа с химическими реактивами должна проводиться в вытяжном шкафу.

5.3 Помещение должно быть оснащено вентиляционными системами по ГОСТ 12.4.021, соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.4 Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать допустимых значений по ГОСТ 12.1.005.

5.5 При работе с метанолом необходимо применять средства индивидуальной защиты (перчатки и очки) от попадания препарата на кожные покровы и слизистые оболочки, а также соблюдать правила личной гигиены. При попадании метанола на кожу или слизистые оболочки необходимо немедленно их промыть большим количеством воды.

Работы с метанолом проводят в вытяжном шкафу при непрерывно действующей приточно-вытяжной вентиляции. Все работы с метанолом следует проводить вдали от огня.

5.6 Останавливающий раствор тест-системы содержит серную кислоту, при работе с ним необходимо использовать средства индивидуальной защиты (перчатки и очки) (см. 12.2). При попадании на кожу или слизистые оболочки останавливающего раствора необходимо немедленно их промыть большим количеством воды.

     6 Условия проведения испытаний


При подготовке и проведении испытаний должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающей среды

от 18°С до 25°С;

- относительная влажность воздуха

не более 80% при 25°С;

- напряжение в сети

(220±10) В.

     

     7 Требования к квалификации оператора


К проведению работ по данной методике допускаются лица, имеющие высшее специальное или среднее специальное образование, прошедшие обучение приемам работы на оборудовании, освоившие выполнение всех операций, предусмотренных методикой, владеющие техникой выполнения ИФА и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении испытаний.

     8 Отбор проб


Отбор проб - по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0 или другим нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

     9 Подготовка проб


Подготовка проб - по ГОСТ ISO 6498 со следующим дополнением.

Анализируемую пробу измельчают таким образом, чтобы 75% размола проходило через сито с размером стороны ячейки 0,85 мм, после чего тщательно перемешивают.

     10 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

10.1 Применяемые при определении массовой доли микотоксинов средства измерений, программное обеспечение, вспомогательные устройства должны иметь свидетельства о поверке, свидетельства об аттестации, сертификаты градуировки, оформленные в соответствии с требованиями нормативных правовых актов в области обеспечения единства измерений, действующих на территории государства, принявшего стандарт.

10.2 Фотометры лабораторные медицинские или фотометры для микропланшетов автоматические, позволяющие проводить измерение оптической плотности растворов, находящихся в луночных планшетах, лунках стрипа или стандартных круглых кюветах 12 мм, в диапазоне длин волн 400-650 нм.

10.3 Тест-система для прямого твердофазного конкурентного ИФА

Тест-система N 1 включает:

- планшет разборный микролуночный полистероловый* без АТ для смешивания реагентов (12 или 6 стрипов голубого или зеленого цвета по 8 лунок);

________________

     * Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


- планшет разборный с микролунками с иммобилизованными АТ (12 или 6 безцветных стрипов по 8 лунок), упакованный в фольгированный пакет с замком;

- флакон с раствором конъюгата;

- флакон с останавливающим раствором;

- флакон с раствором субстрата;

- флакон с буферным раствором;

- флакон с промывочным раствором;

- градуировочные растворы, содержащие микотоксины разной концентрации для градуировки тест-системы.

Примечание - Допускается вместо градуировочных растворов, входящих в состав тест-системы, использовать градуировочные растворы микотоксинов, приготовленные в соответствии с А.2-А.7 (см. приложение А) из стандартных образцов и образца сравнения:

- состава раствора афлатоксина (бензол-ацетонитрил) массовой концентрации 10 мкг/см;

- состава раствора ДОН (ацетонитрил) массовой концентрации 20 мкг/см;

- состава раствора зеараленона (бензол) массовой концентрации 20 мкг/см;

- состава раствора охратоксина (бензол-уксусная кислота) массовой концентрации 50 мкг/см;

- состава раствора Т-2 токсина (бензол) массовой концентрации 100 мкг/см;

- фумонизин с содержанием основного вещества не менее 98%.


Тест-система N 2 включает:

- планшет разборный с микролунками с иммобилизованными неспецифичными АТ;

- флакон с раствором конъюгата;

- флакон с раствором специфичных АТ;

- флакон с останавливающим раствором;

- флакон с раствором субстрата;

- флакон с разбавителем проб;

- флакон с промывочным раствором;

- градуировочные растворы, содержащие микотоксины разной концентрации для градуировки гест-системы N 2.

Примечание - Допускается вместо градуировочных растворов, входящих в состав тест-системы, использовать градуировочные растворы микотоксинов, приготовленные в соответствии с А.9-А.14 (см. приложение А) из стандартных образцов:

- раствор афлатоксина массовой концентрации 3 мкг/см;

- раствор дезоксиниваленола массовой концентрации 200 мкг/см;

- раствор зеараленона массовой концентрации 100 мкг/см;

- раствор охратоксина А массовой концентрации 50 мкг/см;

- раствор Т-2 токсина массовой концентрации 100 мкг/см;

- раствор фумонизина массовой концентрации 500 мкг/см.


Срок и условия хранения всех реактивов, входящих в комплект тест-системы, устанавливает ее изготовитель. Не допускается замораживание реагентов.

Неиспользованные стрипы (лунки) хранят упакованными в плотно закрытом оригинальном фольгированном пакете вместе с имеющимся в нем осушителем в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С.

Примечание - Допускается использование тест-систем различных производителей, позволяющих обеспечить необходимую точность результатов определений согласно разделу 15. Применять рекомендованные ими способы подготовки проб и постановки иммуноферментного анализа следует в соответствии с инструкцией изготовителя.


(Измененная редакция, Изм. N 1).

10.4 Мельница лабораторная со скоростью вращения не менее 3000 об/мин, измельчающая продукт до размера частиц не более 0,85 мм.

10.5 Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,001 г и весы с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,02 мг.

10.6 Шкаф сушильный электрический вентилируемый, обеспечивающий поддержание температуры (130±5)°С.

10.7 Холодильник бытовой по ГОСТ 16317, позволяющий поддерживать температуру от 2°С до 8°С в холодильной камере.

10.8 Компьютер с программным обеспечением для обработки результатов или калькулятор, или другое вычислительное устройство с логарифмической функцией.

10.9 Дозаторы пипеточные одноканальные переменного объема 10-100 мм, 100-1000 мм, 1-5 см и восьмиканальные переменного объема 30-300 мм или шаговая пипетка (далее - степпер) с шагом дозирования 50, 100 мм с метрологическими характеристиками по ГОСТ 28311 в комплекте с одноразовыми наконечниками.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

10.10 Устройство для смешивания, отвечающее следующим требованиям: траектория встряхивания - орбитальная; диаметр орбиты - не менее 4,0 мм; диапазон частоты вращения 800 об/мин.

10.11 pH-метр или иономер с диапазоном измерений активности водородных ионов от 0 до 14 ед. pH и пределом допускаемой абсолютной погрешности измерения не более 0,05 ед. pH.

10.12 Секундомер с пределом допускаемой основной абсолютной погрешности измерения в режиме секундомера не менее с дискретностью времени не менее 0,01 и с диапазоном измерений интервалов времени от 0 до 9 ч 59 мин 59,99 с.

10.13 Колбы мерные 2-25(50, 100, 500, 1000)-2 по ГОСТ 1770.

10.14 Пипетки 1(2)-1(1а, 2, 2а)-2-1(2, 5, 10, 25) по ГОСТ 29227 или пипетки 1-2-1, 1-2-5, 1-2-10 по ГОСТ 29169.

10.15 Цилиндры мерные 1(2)-25(50, 100, 250, 1000) по ГОСТ 1770.

10.16 Колбы конические Кн-2-100(250, 500, 1000)-29/32(34/35) ТХС по ГОСТ 25336.

10.17 Воронки В-56(75)-80(110) ХС по ГОСТ 25336.

10.18 Стаканы Н-1-100(150) по ГОСТ 25336.

10.19 Бумага фильтровальная лабораторная марки ФС по ГОСТ 12026 или фильтры бумажные "красная лента".

10.20 Метанол-яд по ГОСТ 6995, х.ч.

10.21 Стандартные образцы кормов, комбикормов или комбикормового сырья с аттестованным содержанием микотоксинов для контроля правильности результатов.

10.22 Пластиковые емкости для хранения растворов.

10.23 Виалы вместимостью 5-10 см или пробирки типа Эппендорф для разбавления экстрактов.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

10.24 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

10.25 Сито с размером ячеек не более 0,85 мм.

Примечания

1 Рекомендуется для увеличения производительности и повышения точности измерений использование следующего оборудования:

- инкубатор для планшетов, обеспечивающий поддержание температуры от 20°С до 25°С с точностью не более ±1°С;

- устройство отмывки планшетов автоматическое с диапазоном объемов моющего раствора, заливаемого в каждую лунку от 100 до 350 мм.

2 Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками не хуже указанных.

3 Допускается использование реактивов аналогичной или более высокой квалификации по качеству.

     11 Подготовка к выполнению испытания

11.1 Подготовка лабораторной посуды

Лабораторную стеклянную посуду моют специальными моющими средствами, например раствором гипохлорита, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

Запрещается:

- многократное использование одноразовой лабораторной посуды;

- использование бытовых моющих средств для мойки лабораторной посуды.

11.2 Подготовка прибора к работе

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническим описанием.

11.3 Общие требования по работе с тест-системами

Перед использованием все составляющие тест-системы выдерживают при температуре от 18°С до 25°С не менее 30 мин.

Не допускается попадание прямых солнечных лучей на планшет и растворы, входящие в комплект тест-системы.

Рекомендуется помещать под планшет теплоизоляционный материал, например сложенное в несколько слоев бумажное полотенце, с целью устранения воздействия холодной поверхности стола.

Следует избегать воздействия на планшет сильных естественных или искусственных потоков воздуха, вызванных, например, принудительной вентиляцией.

Во время проведения испытаний при работе с субстратом следует избегать воздействия на него прямых солнечных лучей, т.к. он разлагается на свету.

Перед использованием жидкие реактивы перемешивают путем осторожного вращения или переворачивания флаконов. Не допускается переливать обратно в оригинальные флаконы остатки реагентов, используемых при проведении измерений.

Не допускается использование реактивов после истечения срока хранения. При выполнении измерений необходимо придерживаться определенного (указанного в методике) времени инкубации. Изменение времени инкубации может привести к неправильным результатам.

Рекомендуется использовать восьмиканальный пипеточный дозатор или степпер. В этом случае допускается проведение анализа не более 48 экстрактов и градуировочных растворов в сумме (6 стрипов микролунок). При использовании одноканального дозатора допускается анализировать не более 16 экстрактов и градуировочных растворов в сумме (2 стрипа микролунок) в одной постановке.

Для каждого раствора предназначена отдельная лунка. Размечают координаты в планшете для внесения растворов и разбавленных экстрактов. Схема расположения лунок в планшете приведена в приложении Б.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

11.4 Приготовление растворов

11.4.1 Приготовление водного раствора метанола объемной долей 70% (раствора А)

В мерную колбу вместимостью 100 см помещают 70 см метанола, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Срок хранения раствора в плотно закрытой емкости при комнатной температуре - не более 3 мес.

11.4.2 Приготовление промывочного раствора

Приготовление промывочного раствора для определения содержания ДОН для тест-системы N 1

В мерную колбу вместимостью 500 см помещают около 200 см дистиллированной воды и количественно переносят весь объем концентрированного промывочного раствора из комплекта реактивов к тест-системе. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Приготовленный промывочный раствор переносят в пластиковую емкость.

Раствор хранят при температуре от 2°С до 8°С в течение всего времени использования тест-системы.

Приготовление промывочного раствора для определения содержания микотоксинов для тест-системы N 2

В мерную колбу вместимостью 1000 см помещают 100 см концентрированного промывочного раствора из комплекта реактивов к тест-системе. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Раствор хранят при комнатной температуре не более одной недели или при температуре от 2°С до 8°С не более 1 мес.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

11.4.3 Приготовление градуировочных растворов микотоксинов

Для построения градуировочной характеристики каждого микотоксина используют входящие в соответствующий набор тест-системы градуировочные растворы различной концентрации: один раствор, не содержащий микотоксин (далее - нулевая точка), и четыре градуировочных раствора различной концентрации микотоксина для тест-системы N 1 или пять градуировочных растворов для тест-системы N 2. Содержание микотоксинов в градуировочных растворах тест-системы N 1 приведено в таблице А.1, тест-системы N 2 - в таблице А.2 (см. приложение А).

Значения содержания микотоксинов, приписанные градуировочным растворам тест-системы, учитывают коэффициенты, включающие отношение навески к объему экстрагента, разбавления фильтрата и выражены в миллиграммах в килограмме.

Допускается готовить градуировочные растворы из стандартных образцов микотоксинов для тест-системы N 1 в соответствии с А.2-А.7, для тест-системы N 2 - в соответствии с А.9-А.14 (см. приложение А).

Срок хранения градуировочных растворов микотоксинов при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

     12 Проведение испытания

12.1 Приготовление экстрактов микотоксинов

Экстрагирование

Взвешивают анализируемую пробу массой около 20 г, с записью результата до второго десятичного знака, помещают в коническую колбу вместимостью 250 см, добавляют 100 см экстрагента (см. таблицу 1). При использовании тест-системы N 2 для определения охратоксина А к пробе добавляют 50 см экстрагента. Закрывают колбу пробкой и перемешивают в течение 30 мин на устройстве для смешивания. Полученный раствор фильтруют через бумажный складчатый фильтр.

Примечания:

1 При экстракции необходимо соблюдать соотношение массы анализируемой пробы к объему растворителя.

2 Допускается использование ультразвуковой обработки (мощность генератора 35 Вт, рабочая частота 22 кГц) в ультразвуковой бане в течение 30 мин или проведение экстракции в блендере в течение 3 мин с высокой скоростью.

3 Экстракт должен иметь значение pH в интервале 6-8 единиц pH. Излишняя щелочность или кислотность экстракта может повлиять на результаты анализа, поэтому ее необходимо корректировать. Увеличить значение pH раствора можно добавлением в него 1 М раствора гидроокиси калия (КОН), уменьшить значение pH можно добавлением 1 М растворов азотной кислоты (), серной кислоты () или ортофосфорной кислоты ().

4 Допускается вместо фильтрации через бумажный фильтр проводить центрифугирование при 3000 g в течение 5 мин.

Таблица 1

Наименование микотоксина

Экстрагент

Коэффициент разбавления для тест-системы

N 1

N 2

Афлатоксин

Раствор А (см. 11.4.1)

2

2

Сумма афлатоксинов

Раствор А (см. 11.4.1)

1

2

ДОН

Дистиллированная вода

4

5

Зеараленон

Раствор А (см. 11.4.1)

5

2

Охратоксин А

Раствор А (см. 11.4.1)

1

-

Дистиллированная вода

-

2

Т-2 токсин

Раствор А (см. 11.4.1)

1

7

Сумма фумонизинов

Раствор А (см. 11.4.1)

20

15


Разбавление экстрактов для тест-системы N 1

Фильтрат для определения содержания суммы афлатоксинов, охратоксина А, Т-2 токсина используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.

Фильтрат для определения содержания афлатоксина разбавляют буферным раствором в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2. Разбавление экстракта для определения содержания афлатоксина проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 1 см буферного раствора, вносят 1 см фильтрата, перемешивают.

Фильтрат для определения содержания ДОН, зеараленона, суммы фумонизинов разбавляют экстрагентом в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.

Разбавление экстракта для определения содержания ДОН проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 3 см дистиллированной воды, вносят 1 см фильтрата, перемешивают.

Разбавление экстракта для определения содержания зеараленона проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 4 см раствора А, вносят 1 см фильтрата, перемешивают.

Разбавление экстракта для определения содержания суммы фумонизинов проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 1,9 см дистиллированной воды, вносят 0,1 см фильтрата, перемешивают.

Далее проводят градуировку и анализ экстрактов проб по 12.2.

Разбавление экстрактов для тест-системы N 2

Фильтраты для определения содержания разбавляют в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.

Разбавление экстракта для определения содержания афлатоксина , суммы афлатоксинов, охратоксина А, зеараленона разбавителем проб проводят следующим образом: в пробирку типа Эппендорф дозатором помещают 500 мм разбавителя проб, вносят 500 мм фильтрата, перемешивают.

Фильтрат для определения содержания ДОН, суммы фумонизинов разбавляют экстрагентом в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.

Разбавление экстракта для определения содержания ДОН проводят следующим образом: в пробирку типа Эппендорф дозатором помещают 400 мм разбавителя проб, вносят 100 мм фильтрата, перемешивают.

Разбавление экстракта для определения содержания суммы фумонизинов проводят следующим образом: в пробирку типа Эппендорф дозатором помещают 700 мм разбавителя проб, вносят 50 мм фильтрата, перемешивают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

12.2 Проведение градуировки и анализа экстрактов проб

Проведение градуровки и анализа экстрактов проб для тест-системы N 1

Анализ градуировочных растворов и экстрактов проб проводят одновременно. В рамку первого планшета помещают необходимое количество стрипов зеленого (голубого) цвета для смешивания реактивов (схема расположения лунок приведена в приложении Б). В рамку второго планшета помещают такое же количество бесцветных стрипов с иммобилизованными АТ.

Примечание - Допускается помещать стрипы для смешивания реактивов и стрипы с иммобилизованными АТ в один планшет, при этом после смешивания реактивов и переноса растворов стрипы для смешивания удаляют из планшета.


Отмеряют необходимое количество раствора конъюгата из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 240 мм на лунку или 2 см на стрип) и помещают в отдельную емкость (или в специальную кювету при использовании восьмиканального пипеточного дозатора). Используя восьмиканальный дозатор, осторожно, не касаясь лунок, вносят по 200 мм раствора конъюгата в каждую лунку стрипов зеленого (голубого) цвета первого планшета. Затем одноканальным дозатором вносят по 100 мм каждого градуировочного раствора или экстракта пробы, используя для каждого раствора новый наконечник.

Примечание - Допускается уменьшать объем растворов, но при этом отношение объема конъюгата к объему экстракта (градуировочного раствора) должно быть 2:1. Объем жидкости, переносимый из лунок для смешивания в лунки с антителами, должен быть одинаковым (100 мм).


Восьмиканальным дозатором с новыми наконечниками трижды смешивают содержимое лунок пипетированием (набирают и выпускают раствор) и быстро переносят по 100 мм содержимого каждой лунки стрипа зеленого (голубого) цвета в соответствующую ей лунку бесцветного стрипа второго планшета. Инкубируют в течение времени, указанного в таблице 2.

Примечание - Необходимо избегать встряхивания планшета с антителами, поскольку это может привести к разрушению сцепки между антигеном и антителом или к смешиванию содержимого разных лунок.

Таблица 2

Наименование микотоксина

Разбав-
ляющий раствор

Время инкубации с раствором конъюгата, мин

Время инкубации с раствором конъюгата и раствором специфи-
ческих АТ, мин

Время инкубации с раствором субстрата, мин

Промывочный раствор

Длина волны, нм

тест-
система N 1

тест-
система N 2

тест-
система N 1

тест-
система N 2

тест-
система N 1

тест-система N 2

тест-
система N 1

тест-
система N 2

Афлатоксин

Раствор A (см. 11.4.1)

10

10

10

5

Дистилли-
рованная вода

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

450*

620

Сумма афлатоксинов

Раствор A (см. 11.4.1)

15

5

5

5

Дистилли-
рованная вода

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

450

620

ДОН

Дистил-
лированная вода

15

10

5

5

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

450

620

Зеараленон

Раствор A (см. 11.4.1)

10

10

10

5

Дистилли-
рованная вода

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

450*

620

Охратоксин A

Раствор A (см. 11.4.1)

10

10

10

5

Дистилли-
рованная вода

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

450*

620

Т-2 токсин

Раствор A (см. 11.4.1)

10

10

5

5

Дистилли-
рованная вода

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

450*

620

Сумма фумонизинов

Раствор A (см. 11.4.1)

10

10

10

5

Дистилли-
рованная вода

Промы-
вочный раствор (см. 11.4.2)

450

620

* Допускается использование дифференциального фильтра на 630 нм.


Удаляют содержимое микролунок, промывают лунки промывочным раствором (см. таблицу 2). Процедуру промывки планшета рекомендуется проводить с помощью устройства для отмывки планшетов, задавая следующие параметры программы: количество циклов промывки - от трех до четырех, объем заливаемого промывочного раствора - 300 мм. Допускается ручная промывка с использованием многоканального дозатора. При этом в лунки планшета вносят 4 раза по 300 мм промывочного раствора с последующим резким переворачиванием и встряхиванием планшета.

Планшет переворачивают лунками вниз на фильтровальную бумагу и окончательно удаляют из лунок остатки промывочного раствора легким постукиванием.

Отмеряют необходимое количество раствора субстрата из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 120 мм на лунку или 1 см на стрип) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор или степпер, вносят по 100 мм раствора субстрата в каждую лунку. Инкубируют в течение времени, указанного в таблице 2.

Отмеряют необходимое количество останавливающего раствора из комплекта реактивов к тест- системе (примерно 120 мм на лунку или 1 см на стрип) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор или степпер, вносят по 100 мм останавливающего раствора в каждую лунку. Цвет раствора изменяется с голубого на желтый.

Измеряют оптическую плотность D содержимого лунок при длине волны, указанной в таблице 2. Значения оптической плотности записывают с точностью до второго десятичного знака и заносят в форму для записи (см. приложение В).

Примечание - Перед фотометрией нужно избавиться от воздушных пузырьков в лунке, поскольку они могут повлиять на результат анализа.


Далее проводят построение и оценку градуировочной характеристики по 12.3.

Проведение градуровки и анализа экстрактов проб для тест-системы N 2

Анализ градуировочных растворов и экстрактов проб проводят одновременно. В рамку планшета помещают необходимое количество бесцветных стрипов с неспецифичными антителами.

Отмеряют необходимое количество раствора конъюгата и специфичных АТ (примерно 70 мм на лунку или 560 мм на стрип) и помещают в отдельные емкости (или в специальные кюветы при использовании восьмиканального пипеточного дозатора). В лунки планшета вносят по 100 мм каждого градуировочного раствора или экстракта пробы (по 50 мм для охратоксина и суммы афлатоксинов), используя для каждого раствора новый наконечник, добавляют с помощью степпера 50 мм конъюгата, 50 мм специфичных АТ.

Примечание - Следует строго соблюдать последовательность внесения реактивов.

Удаляют содержимое микролунок, промывают лунки промывочным раствором (см. таблицу 2). Процедуру промывки планшета рекомендуется проводить с помощью устройства для отмывки планшетов, задавая следующие параметры программы: количество циклов промывки - от трех до четырех, объем заливаемого промывочного раствора - 300 мм. Допускается ручная промывка с использованием многоканального дозатора. При этом в лунки планшета вносят 4 раза по 300 мм промывочного раствора с последующим резким переворачиванием и встряхиванием планшета.

Планшет переворачивают лунками вниз на фильтровальную бумагу и окончательно удаляют из лунок остатки промывочного раствора легким постукиванием.

Отмеряют необходимое количество раствора субстрата из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 120 мм на лунку или 1 см на стрип) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор или степпер, вносят по 100 мм раствора субстрата в каждую лунку. Инкубируют в течение времени, указанного в таблице 2.

Отмеряют необходимое количество останавливающего раствора из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 120 мм на лунку или 1 см на стрип) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор или степпер, вносят по 100 мм останавливающего раствора в каждую лунку. Цвет раствора изменяется с голубого на желтый.

Измеряют оптическую плотность содержимого лунок при длине волны, указанной в таблице 2. Значения оптической плотности записывают с точностью до второго десятичного знака и заносят в форму для записи (см. приложение В).

Примечание - Перед фотометрией нужно избавиться от воздушных пузырьков в лунке, поскольку они могут повлиять на результат анализа.


(Измененная редакция, Изм. N 1).

7 закупок
Свободные
Р
Заблокированные
Р
Роль в компании Пользователь

Для продолжения необходимо войти в систему

После входа Вам также будет доступно:
  • Автоматическая проверка недействующих стандартов в закупке
  • Создание шаблона поиска
  • Добавление закупок в Избранное