1
Доступно поисковых запросов: 1 из 2
Следующий пробный период начнётся: 02 февраля 2022 в 09:10
Снять ограничение

ГОСТ 34140-2017

Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Действующий стандарт
Проверено:  25.01.2022

Информация

Название Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием
Название английское Food products, feed, food raw materials. Method for determination of mycotoxins by high performance liquid chromatography-mass spectrometry
Дата актуализации текста 01.01.2021
Дата актуализации описания 01.01.2021
Дата издания 14.07.2020
Дата введения в действие 01.07.2018
Область и условия применения Настоящий стандарт распространяется на пищевую продукцию, продовольственное сырье в части зерновых культур, корма, кормовое сырье в части зерновых и масличных культур, комбикорма и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее – ВЭЖХ-МС/МС) для определения содержания микотоксинов
Опубликован Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2020
Утверждён в Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии
Дата принятия 18.07.2017

Расположение в каталоге ГОСТ

ГОСТ 34140-2017

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения микотоксинов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Food products, feed, food raw materials. Method for determination of mycotoxins by high performance liquid chromatography - mass spectrometry



МКС 65.120

         67.050

         67.060     

Дата введения 2018-07-01

     

Предисловие


Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 июня 2017 г. N 51)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 июля 2017 г. N 719-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34140-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6 ИЗДАНИЕ (май 2020 г.) с Поправкой (ИУС 1-2020)


Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на пищевую продукцию, продовольственное сырье в части зерновых культур, корма, кормовое сырье в части зерновых и масличных культур, комбикорма и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее - ВЭЖХ-МС/МС) для определения содержания микотоксинов.

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085 Арматура трубопроводная. Клапаны предохранительные. Выбор и расчет пропускной способности

ГОСТ 61 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

________________

В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.


ГОСТ ISO 6497 Корма. Отбор проб

ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 13496.0 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 13586.3 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13979.0 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 22300 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия     

ГОСТ 26312.1 Крупа. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 27668 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Сущность метода


Метод основан на экстракции микотоксинов из анализируемой пробы, идентификации и количественном определении их по площадям пиков ион-продуктов с помощью градуировочной характеристики методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга выбранных реакций (МРМ).

     4 Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1 Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3 Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу.

4.4 При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила по электробезопасности по ГОСТ 12.1.019 и правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением, по ГОСТ 12.2.085.

4.5 Применяемые средства измерений должны иметь свидетельства о поверке, вспомогательные устройства - свидетельства об аттестации, оформленные в соответствии с требованиями национального законодательства в области обеспечения единства измерений.

4.6 К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой ВЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.7 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- температура окружающего воздуха .......................................................................................... от 15°С до 30°С;

- относительная влажность воздуха ............................................................................................ от 20% до 80%.

     

     5 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для измерения содержания микотоксинов применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и посуду:

- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой погрешности не более ±0,03 г;


- весы специального (I) класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,5 мг;


- масс-спектрометр с квадрупольным анализатором с диапазоном измерений от 50 до 800 атомных единиц массы (а.е.м), массовым разрешением не менее 1,0 а.е.м на полувысоте пика, с погрешностью измерений массы не более ±0,5 а.е.м, с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);

- систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из градиентного насоса, системы фильтрования и дегазации подвижных фаз, термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (40±1)°С;

- колонку хроматографическую, заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц не более 5 мкм, длиной 150 мм и внутренним диаметром 2,1 мм;

- компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

- баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм;

- камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 15°С до минус 25°С;

- мельницу лабораторную;

- сито лабораторное металлическое с ячейкой 0,5 мм;

- систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм·см;

- холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 2°С до 8°С;

- центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 3500 g и с адаптерами для пробирок вместимостью 50 см;

- центрифугу лабораторную с центробежным ускорением не менее 15000 g и с адаптерами для микроцентрифужных пробирок;

- шейкер вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2000 об/мин;

- шейкер качающийся с частотой встряхивания от 2 до 50 об/мин;

- шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 200°С и погрешностью поддержания заданной температуры не более ±5°С;

- пробы, не содержащие микотоксинов, подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8, в зависимости от типа исследуемой матрицы ("чистые" пробы);

_______________

Допускается в "чистых" пробах присутствие микотоксинов на уровне не более 0,2% от нижнего градуировочного уровня для каждого микотоксина.


- фильтры нейлоновые мембранные с размером диаметра пор не более 0,45 мкм;

- виалы (флаконы) полипропиленовые или пробирки полипропиленовые вместимостью 50 см с завинчивающимися крышками;

- колбы 2-10-1 с пришлифованными пробками по ГОСТ 1770;

- колбы 1-100(1000)-2 по ГОСТ 1770;

- пипетки одноканальные переменной вместимости 20-200 мм с пределом допускаемого относительного отклонения среднеарифметического значения фактического объема дозы от номинального не более ±1,5%;

- пипетки одноканальные переменной вместимости 100-1000 мм с пределом допускаемого относительного отклонения среднеарифметического значения фактического объема дозы от номинального не более ±1%;

- пробирки микроцентрифужные полипропиленовые вместимостью 1,5 см;

- цилиндры 1-10(100, 1000)-1 по ГОСТ 1770.

(Поправка)

5.2 При определении содержания микотоксинов применяют следующие реактивы:

- ацетат аммония с массовой долей основного вещества не менее 99,0%;

- ацетон по ГОСТ 2603;

- ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99,9%;

- воду деионизированную для ВЭЖХ, полученную с использованием системы производства ультрачистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709;

- кислоту уксусную по ГОСТ 61;

- метанол по ГОСТ 6995, х.ч.;

- эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетат) по ГОСТ 22300, ч.д.а.

5.3 При измерении содержания микотоксинов в качестве образцов сравнения для приготовления исходных растворов применяют соединения с массовой долей основного вещества не менее 97,0%:

- 3-ацетил-дезоксиниваленол;

- 15-ацетил-дезоксиниваленол;

- агроклавин;

- альтернариол;

- альтернариола-метиловый эфир;

- афлатоксин ;

- афлатоксин ;

- афлатоксин ;

- афлатоксин ;

- боверицин;

- вортманнин;

- глиотоксин;

- гризеофульвин;

- дезоксиниваленол;

- дезоксиниваленол-3-глюкозид;

- деэпоксидезоксиниваленол;

- диацетоксисцирпенол;

- зеараленон;

- койевая кислота;

- мелеагрин;

- микофеноловая кислота;

- монилиформин;

- НТ-2 токсин;

- неосоланиол;

- ниваленол;

- охратоксин А;

- охратоксин В;

- паксиллин;

- патулин;

- пенициллиновая кислота;

- рокфортин С;

- роридин А;

- стахиботрилактам;

- стеригматоцистин;

- Т-2 тетраол;

- Т-2 токсин;

- Т-2 триол;

- тентоксин;

- тенуазоновая кислота;

- фузаренон X;

- фузариевая кислота;

- фумагиллин;

- фумонизин ;

- фумонизин ;

- фумонизин ;

- циклопиазоновая кислота;

- цитреовиридин;

- цитринин;

- эргокорнин.

5.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также вспомогательных устройств, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

     6 Подготовка к проведению измерений

     6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1 Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).

6.1.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105°С до 110°С.

6.1.4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

     6.2 Приготовление растворов

6.2.1 Приготовление растворов подвижных фаз А и Б

6.2.1.1 Подвижная фаза А

Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см приливают 890 см деионизированной воды, добавляют 100 см метанола, 10 см уксусной кислоты и 0,2 г ацетата аммония, перемешивают.

6.2.1.2 Подвижная фаза Б

Для приготовления подвижной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000 см приливают 970 см метанола, добавляют 20 см деионизированной воды, 10 см уксусной кислоты и 0,2 г ацетата аммония, перемешивают.

Срок хранения растворов при комнатной температуре - не более 3 мес.

6.2.2 Приготовление раствора для экстракции

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 790 см ацетонитрила, 200 см деионизированной воды и 10 см уксусной кислоты, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 3 мес.

     6.3 Приготовление градуировочных растворов


Для приготовления исходных растворов с массовой концентрацией 1000 мкг/см или с массовой концентрацией 100 мкг/см для каждого микотоксина рассчитывают необходимую массу -го вещества, мг, с точностью до первого десятичного знака, с учетом содержания основного вещества по формуле

,                                                   (1)


где - концентрация исходного раствора, мкг/см;

- объем мерной колбы, см;

- массовая доля основного вещества, %.

6.3.1 Приготовление исходных растворов фумонизина , фумонизина , фумонизина , фузариевой кислоты, койевой кислоты

Для приготовления исходных растворов с массовой концентрацией 1000 мкг/см в мерные колбы вместимостью 10 см вносят по отдельности рассчитанные массы фумонизина , фумонизина , фумонизина , фузариевой кислоты, койевой кислоты. Добавляют 8 см ацетонитрила, перемешивают, помещают в ультразвуковую баню на 15 мин и доводят объем до метки ацетонитрилом.

6.3.2 Приготовление исходных растворов

Для приготовления исходных растворов с массовой концентрацией 100 мкг/см в мерные колбы вместимостью 10 см вносят по отдельности рассчитанные массы микотоксинов, перечисленных в 5.3 (за исключением микотоксинов, указанных в 6.3.1). Добавляют 8 см ацетонитрила, перемешивают, помещают в ультразвуковую баню на 15 мин и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Срок хранения растворов и при температуре от минус 15°С до минус 25°С - не более 12 мес.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

6.3.3 Приготовление рабочего раствора микотоксинов

Для приготовления рабочего раствора в мерную колбу вместимостью 100 см вносят исходные растворы и в объемах, указанных в таблице 1, и доводят до метки ацетонитрилом.     


Таблица 1 - Вносимый объем исходных растворов и

Микотоксин

Массовая концентрация микотоксина в исходном растворе или , мкг/см

Вносимый объем исходных растворов или , см

Массовая концентрация микотоксина в рабочем растворе , мкг/см

3-Ацетил-дезоксиниваленол

100

100

1,0

15-Ацетил-дезоксиниваленол

100

100

1,0

Агроклавин

100

100

1,0

Альтернариол

100

100

1,0

Альтернариола-метиловый эфир

100

100

1,0

Афлатоксин

100

10

0,1

Афлатоксин

100

10

0,1

Афлатоксин

100

10

0,1

Афлатоксин

100

10

0,1

Боверицин

100

500

5,0

Вортманнин

100

100

1,0

Глиотоксин

100

100

1,0

Гризеофульвин

100

100

1,0

Дезоксиниваленол

100

500

5,0

Дезоксиниваленол-3-глюкозид

100

500

5,0

Деэпокси-дезоксиниваленол

100

100

1,0

Диацетоксисцирпенол

100

100

1,0

Зеараленон

100

200

2,0

Койевая кислота

1000

100

10,0

Мелеагрин

100

100

1,0

Микофеноловая кислота

100

100

1,0

Монилиформин

100

100

1,0

НТ-2 токсин

100

100

1,0

Неосоланиол

100

100

1,0

Ниваленол

100

500

5,0

Охратоксин А

100

10

0,1

Охратоксин В

100

10

0,1

Паксиллин

100

10

0,1

Патулин

100

100

1,0

Пенициллиновая кислота

100

100

1,0

Рокфортин С

100

100

1,0

Роридин А

100

100

1,0

Стахиботрилактам

100

100

1,0

Стеригматоцистин

100

100

1,0

Т-2 тетраол

100

100

1,0

Т-2 токсин

100

100

1,0

Т-2 триол

100

100

1,0

Тентоксин

100

100

1,0

Тенуазоновая кислота

100

100

1,0

Фузаренон X

100

500

5,0

Фузариевая кислота

1000

100

10,0

Фумагиллин

100

100

1,0

Фумонизин

1000

100

10,0

Фумонизин

1000

100

10,0

Фумонизин

1000

100

10,0

Циклопиазоновая кислота

100

100

1,0

Цитреовиридин

100

100

1,0

Цитринин

100

500

5,0

Эргокорнин

100

100

1,0

6.3.4 Приготовление рабочего раствора микотоксинов

В мерную колбу вместимостью 10 см вносят 1,0 см рабочего раствора , доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

Растворы и хранят при температуре от 2°С до 8°С не более 6 мес.

6.3.5 Приготовление матричных градуировочных растворов микотоксинов

Матричные градуировочные растворы готовят в микроцентрифужных пробирках путем обработки экстрактов "чистых" проб согласно разделу 7, в которые вносят рабочие растворы определяемых микотоксинов и в соответствии с таблицей 2.


Таблица 2 - Приготовление матричных градуировочных растворов

Матричный градуировочный раствор

Вносимый объем


подвижной фазы A, мм

рабочего раствора , мм

рабочего раствора , мм

экстракта "чистой" пробы, мм


490

-

10

500


480

-

20

500


400

-

100

500


480

20

-

500


400

100

-

500


300

200

-

500


Массовые концентрации микотоксинов в матричных градуировочных растворах приведены в таблице 3.


Таблица 3 - Массовые концентрации микотоксинов в матричных градуировочных растворах

Микотоксин

Массовая концентрация микотоксина, нг/см



3-Ацетил-дезоксиниваленол

1,0

2,0

10

20

100

200

15-Ацетил-дезоксиниваленол

1,0

2,0

10

20

100

200

Агроклавин

1,0

2,0

10

20

100

200

Альтернариол

1,0

2,0

10

20

100

200

Альтернариола-метиловый эфир

1,0

2,0

10

20

100

200

Афлатоксин

0,1

0,2

1

2

10

20

Афлатоксин

0,1

0,2

1

2

10

20

Афлатоксин

0,1

0,2

1

2

10

20

Афлатоксин

0,1

0,2

1

2

10

20

Боверицин

5,0

10,0

50

100

500

1000

Вортманнин

1,0

2,0

10

20

100

200

Глиотоксин

1,0

2,0

10

20

100

200

Гризеофульвин

1,0

2,0

10

20

100

200

Дезоксиниваленол

5,0

10,0

50

100

500

1000

Дезоксиниваленол-3-глюкозид

5,0

10,0

50

100

500

1000

Деэпокси-дезоксиниваленол

1,0

2,0

10

20

100

200

Диацетоксисцирпенол

1,0

2,0

10

20

100

200

Зеараленон

2

4,0

20

40

200

400

Койевая кислота

10,0

20,0

100

200

1000

2000

Мелеагрин

1,0

2,0

10

20

100

200

Микофеноловая кислота

1,0

2,0

10

20

100

200

Монилиформин

1,0

2,0

10

20

100

200

НТ-2 токсин

1,0

2,0

10

20

100

200

Неосоланиол

1,0

2,0

10

20

100

200

Ниваленол

5,0

10,0

50

100

500

1000

Охратоксин А

0,1

0,2

1

2

10

20

Охратоксин В

0,1

0,2

1

2

10

20

Паксиллин

0,1

0,2

1

2

10

20

Патулин

1,0

2,0

10

20

100

200

Пенициллиновая кислота

1,0

2,0

10

20

100

200

Рокфортин С

1,0

2,0

10

20

100

200

Роридин А

1,0

2,0

10

20

100

200

Стахиботрилактам

1,0

2,0

10

20

100

200

Стеригматоцистин

1,0

2,0

10

20

100

200

Т-2 тетраол

1,0

2,0

10

20

100

200

Т-2 токсин

1,0

2,0

10

20

100

200

Т-2 триол

1,0

2,0

10

20

100

200

Тентоксин

1,0

2,0

10

20

100

200

Тенуазоновая кислота

1,0

2,0

10

20

100

200

Фузаренон X

5,0

10,0

50

100

500

1000

Фузариевая кислота

10,0

20

100

200

1000

2000

Фумагиллин

1,0

2,0

10

20

100

200

Фумонизин

10,0

20

100

200

1000

2000

Фумонизин

10,0

20

100

200

1000

2000

Фумонизин

10,0

20

100

200

1000

2000

Циклопиазоновая кислота

1,0

2,0

10

20

100

200

Цитреовиридин

1,0

2,0

10

20

100

200

Цитринин

5,0

10,0

50

100

500

1000

Эргокорнин

1,0

2,0

10

20

100

200


Пробирки встряхивают в вибрационном шейкере в течение 1 мин и проводят обработку пробы согласно разделу 7.

Срок хранения растворов при температуре от 2°С до 8°С - не более 72 ч.

     7 Отбор и подготовка проб

     7.1 Отбор проб

7.1.1 Отбор проб зерна и продуктов переработки зерна - по ГОСТ 13586.3.

7.1.2 Отбор проб круп - по ГОСТ 26312.1.

7.1.3 Отбор проб муки и отрубей - по ГОСТ 27668.

7.1.4 Отбор проб кормов - по ГОСТ ISO 6497.

7.1.5 Отбор проб жмыхов, шротов - по ГОСТ 13979.0.

7.1.6 Отбор проб комбикормов, комбикормового сырья - по ГОСТ 13496.0.

     7.2 Подготовка проб


Из средней пробы зерна, продуктов его переработки, круп, кормов, комбикормов, жмыхов, шротов выделяют около 100 г продукта, измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с отверстиями диаметром 0,5 мм, перемешивают.

Из средней пробы муки, отрубей выделяют около 100 г продукта, тщательно перемешивают.

Взвешивают 5,00 г подготовленной пробы и помещают в виалу или полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см. Добавляют 25 см раствора для экстракции (см. 6.2.2), помещают на 30 с в вибрационный шейкер, затем - для перемешивания в течение 60 мин на качающийся шейкер. Центрифугируют при 3500 g в течение 20 мин.

В микроцентрифужную пробирку вносят 500 мм подвижной фазы А и 500 мм верхнего слоя экстракта. Центрифугируют при 15000 g при температуре 4°С в течение 20 мин. Пипеточным дозатором отбирают 700 мм верхнего слоя экстракта и фильтруют через микрофильтр с нейлоновой мембраной в виалу для ВЭЖХ-МС/МС анализа.

     8 Порядок выполнения анализа

     8.1 Условия хроматографических измерений

8.1.1 Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2 Например, для колонки диаметром 2,1 мм, длиной 150 мм, с обращенно-фазовым сорбентом С18, с размером частиц не более 5,0 мкм, соблюдают следующие условия хроматографирования:

- температура колонки - 40°С;

- скорость потока подвижной фазы - 0,25 см/мин;

- температура в отсеке устройства ввода проб - 10°С.

- объем вводимой пробы - 20 мм.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования в соответствии с таблицей 4.


Таблица 4 - Условия градиентного элюирования

Время, мин

Подвижная фаза А, %

Подвижная фаза Б, %

0,0

100

0

2,0

100

0

12,0

0

100

16,0

0

100

16,1

100

0

25,0

100

0

8.1.3 Параметры режима мониторинга множественных реакций (МРМ) при измерении микотоксинов приведены в таблицах 5 и 6.

Регистрацию положительных и отрицательных ионов проводят путем двух отдельных последовательных измерений.

Настройки масс-спектрометрического детектора (источника ионов, ионной оптики) устанавливают при внедрении метода на каждой единице оборудования путем прямого ввода анализируемых веществ в масс-спектрометр и установления оптимальных характеристик согласно рекомендациям производителя масс-спектрометра.


Таблица 5 - Параметры режима МРМ при регистрации положительных ионов

Микотоксин

Ион-предшественник,

Ион-продукт 1/ион-
продукт 2

15-Ацетил-дезоксиниваленол

339

322/304

Агроклавин

239

183/208

Афлатоксин

313

128/241

Афлатоксин

315

259/287

Афлатоксин

329

243/200

Афлатоксин

331

245/189

Боверицин

807

384/784

Вортманнин

429

355/295

Глиотоксин

327

263/245

Гризеофульвин

353

165/215

Диацетоксисцирпенол

384

307/105

Койевая кислота

143

69/113

Мелеагрин

434

403/334

Микофеноловая кислота

338

207/303

НТ-2 токсин

442

263/105

Неосоланиол

400

215/185

Охратоксин А

404

239/102

Охратоксин В

370

205/103

Паксиллин

436

182/167

Пенициллиновая кислота

171

125/97

Рокфортин С

390

193/322

Роридин А

550

249/231

Стахиботрилактам

386

178/150

Стеригматоцистин

325

310/281

Т-2 тетраол

316

215/281

Т-2 токсин

484

215/185

Т-2 триол

400

215/281

Фузариевая кислота

180

152/134

Фумагиллин

459

177/131

Фумонизин

722

334/704

Фумонизин

706

336/688

Фумонизин

706

336/319

Цитреовиридин

403

139/297

Цитринин

251

233/205

Эргокорнин

562

544/223



Таблица 6 - Параметры режима МРМ при регистрации отрицательных ионов

Микотоксин

Ион-предшественник,

Ион-продукт 1/ион-
продукт 2

3-Ацетил-дезоксиниваленол

397

59/337

Альтернариол

257

213/215

Альтернариола-метиловый эфир

271

256/227

Дезоксиниваленол

295

59/265

Дезоксиниваленол-3-глюкозид

517

427/59

Деэпокси-дезоксиниваленол

339

59/249

Зеараленон

317

131/175

Монилиформин

97

41

Ниваленол

371

59/281

Патулин

153

109/135

Тентоксин

413

141/271

Тенуазоновая кислота

196

139/112

Фузаренон X

413

59/353

Циклопиазоновая кислота

335

140/195

     

     8.2 Построение градуировочной характеристики


Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии измерений с помощью программного обеспечения хромато-масс-спектрометра.

8.2.1 Проводят однократные измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.5, в порядке возрастания концентраций микотоксинов в соответствии с таблицей 3.

8.2.2 Вычисление площади пика проводят для каждого иона-продукта анализируемых микотоксинов. Допускается проведение количественных измерений по одному, наиболее интенсивному иону-продукту

8.2.3 При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию, при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,98.

8.2.4 Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации микотоксинов в анализируемых пробах выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.2.5 Градуировочную характеристику строят заново при каждой серии измерений.

     8.3 ВЭЖХ-МС/МС измерение

8.3.1 Для измерения содержания микотоксинов проводят ВЭЖХ-МС/МС анализ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования.

8.3.2 Анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

- подвижная фаза А;

- "чистая" проба;

- градуировочные растворы (см. 6.3.5);

- экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3 В инжектор хроматографа вводят 20 мм пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7, и проводят измерения в условиях, используемых при установлении градуировочной зависимости.

8.3.4 Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ионов-продуктов каждого микотоксина, соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов.

     9 Метрологические характеристики


Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания микотоксинов с относительной расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата 2 и доверительной вероятности 0,95, указанной в таблице 7.


Таблица 7 - Показатели точности и прецизионности метода при измерении содержания микотоксинов

Микотоксин

Диапазон измерений содержания, мкг/кг

Значение относительной расширенной неопреде-
ленности , %, при коэффи-
циенте охвата 2

Показатель повторяе-
мости (относи-
тельное стандартное отклонение повторяе-
мости) , %

Показатель воспроиз-
водимости (относительное стандартное отклонение воспроиз-
водимости) , %

Предел повторяе-
мости , % (при 0,95, 2)

3-Ацетил-
дезоксиниваленол

От 100 до 2000 включ.

38

12

18

33

15-Ацетил-
дезоксиниваленол

От 100 до 1000 включ.

68

16

32

45

Св. 1000 до 2000 включ.

35

11

16

30

Агроклавин

От 10 до 200 включ.

51

18

24

50

Св. 200 до 1000 включ.

36

11

17

30

Альтернариол

От 10 до 20 включ.

74

21

35

59

Св. 20 до 200 включ.

54

16

25

43

От 200 до 2000 включ.

33

10

16

28

Альтернариола-
метиловый эфир

От 20 до 200 включ.

74

23

35

63

Св. 200 до 1000 включ.

63

13

30

36

Св. 1000 до 2000 включ.

41

7

19

19

Афлатоксин

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Св. 20 до 200 включ.

31

10

14

28

Афлатоксин

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Св. 20 до 200 включ.

31

10

14

28

Афлатоксин

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Св. 20 до 200 включ.

31

10

14

28

Афлатоксин

От 1 до 20 включ.

53

15

25

42

Св. 20 до 200 включ.

31

10

14

28

Боверицин

От 50 до 1000 включ.

67

20

31

56

Св. 1000 до 10000 включ.

43

13

20

36

Вортманнин

От 20 до 100 включ.

43

18

31

51

Св. 100 до 2000 включ.

19

12

16

34

Глиотоксин

От 100 до 2000 включ.

54

21

30

58

Гризеофульвин

От 20 до 2000 включ.

46

15

22

42

Дезоксиниваленол

От 100 до 500 включ.

70

22

33

61

Св. 500 до 10000 включ.

58

20

27

55

Дезоксиниваленол-
3-глюкозид

От 100 до 200 включ.

72

17

34

48

Св. 200 до 2000 включ.

48

13

23

36

Деэпокси-
дезоксиниваленол

От 200 до 2000 включ.

75

14

35

40

Диацетоксисцирпенол

От 10 до 200 включ.

50

14

23

38

Св. 200 до 2000 включ.

34

11

16

30

Зеараленон

От 20 до 40 включ.

65

18

31

51

Св. 40 до 400 включ.

39

12

18

32

Св. 400 до 4000 включ.

31

7

14

20

Койевая кислота

От 10000 до 20000 включ.

65

21

30

59

Мелеагрин

От 20 до 200 включ.

46

16

22

45

Св. 200 до 2000 включ.

28

8

13

21

Микофеноловая кислота

От 20 до 100 включ.

43

12

20

33

Св. 100 до 2000 включ.

31

12

16

33

Монилиформин

От 20 до 200 включ.

62

23

29

65

Св. 200 до 2000 включ.

48

11

23

30

НТ-2 токсин

От 10 до 20 включ.

61

17

25

47

Св. 20 до 1000 включ.

54

17

25

47

Св. 1000 до 2000 включ.

35

9

17

24

Неосоланиол

От 10 до 20 включ.

58

15

23

41

Св. 20 до 2000 включ.

36

12

17

32

Ниваленол

От 100 до 500 включ.

54

21

26

58

Св. 500 до 5000 включ.

54

12

25

33

Св. 5000 до 10000 включ.

39

13

18

36

Охратоксин А

От 1 до 10 включ.

72

16

34

43

Св. 10 до 20 включ.

47

12

22

33

Св. 20 до 200 включ.

32

10

15

29

Охратоксин В

От 1 до 20 включ.

62

20

29

56

Св. 20 до 200 включ.

34

8

16

23

Паксиллин

От 20 до 200 включ.

43

13

20

35

Патулин

От 1000 до 2000 включ.

73

23

34

65

Пенициллиновая кислота

От 20 до 1000 включ.

65

23

31

65

Св. 1000 до 2000 включ.

48

17

23

47

Рокфортин С

От 10 до 100 включ.

68

19

32

53

Св. 100 до 2000 включ.

38

13

18

35

Роридин А

От 20 до 100 включ.

65

18

31

51

Св. 100 до 2000 включ.

56

14

22

39

Стахиботрилактам

От 10 до 20 включ.

69

25

32

70

Св. 20 до 200 включ.

44

10

21

27

Св. 200 до 2000 включ.

33

10

16

28

Стеригматоцистин

От 10 до 100 включ.

53

21

25

57

Св. 100 до 1000 включ.

38

11

18

31

Св. 1000 до 2000 включ.

24

9

14

25

Т-2 тетраол

От 100 до 200 включ.

54

24

29

67

Св. 200 до 2000 включ.

52

15

25

42

Т-2 токсин

От 10 до 100 включ.

46

13

22

37

Св. 100 до 2000 включ.

38

11

18

30

Т-2 триол

От 20 до 100 включ.

54

15

26

41

Св. 100 до 2000 включ.

43

10

20

27

Тентоксин

От 20 до 1000 включ.

53

11

25

30

Св. 1000 до 2000 включ.

25

8

12

22

Тенуазоновая кислота

От 20 до 1000 включ.

67

21

31

58

Св. 1000 до 2000 включ.

41

13

19

35

Фузаренон X

От 500 до
10000 включ.

50

12

23

33

Фузариевая кислота

От 100 до 1000 включ.

75

16

35

44

Св. 1000 до 2000 включ.

44

16

21

44

Св. 2000 до 20000 включ.

33

12

16

34

Фумагиллин

От 100 до 200 включ.

56

12

26

33

Св. 200 до 2000 включ.

29

10

14

29

Фумонизин

От 100 до 1000 включ.

71

12

33

32

Св. 1000 до 20000 включ.

44

12

21

32

Фумонизин

От 100 до 10000 включ.

67

22

31

60

Св. 10000 до 20000 включ.

30

9

14

26

Фумонизин

От 100 до 2000 включ.

62

18

29

50

Св. 2000 до 10000 включ.

48

11

23

31

Св. 10000 до 20000 включ.

37

9

17

26

Циклопиазоновая кислота

От 20 до 100 включ.

74

29

35

81

Св. 100 до 200 включ.

65

13

30

35

Св. 200 до 2000 включ.

49

9

23

25

Цитреовиридин

От 100 до 1000 включ.

49

14

23

40

Св. 1000 до 2000 включ.

27

10

13

29

Цитринин

От 50 до 100 включ.

68

19

32

53

Св. 100 до 1000 включ.

44

14

20

39

Св. 1000 до 2000 включ.

27

10

13

29

Эргокорнин

От 20 до 200 включ.

49

14

23

40

Св. 200 до 2000 включ.

28

10

13

29

     

     10 Обработка результатов измерений

10.1 В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения массовой концентрации микотоксинов в анализируемой пробе.

10.2 Содержание микотоксина в пробе , мкг/кг, вычисляют по формуле

,                                                   (2)


где 2 - фактор разведения экстракта;

- массовая концентрация микотоксина в анализируемой пробе, определенная по градуировочному графику, нг/см;

- объем раствора для экстракции, см;

- масса навески, г.

10.3 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений пробы, если выполнено условие приемлемости по ГОСТ ИСО 5725-6-2003 (пункт 5.2.2).

     11 Оформление результатов измерений


Содержание -го микотоксина, мкг/кг, представляют в виде

при 0,95,                                     (3)


где - среднеарифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания -го микотоксина в анализируемой пробе, мкг/кг;

- значение относительной расширенной неопределенности содержания -го микотоксина для соответствующего диапазона измерений, % (в соответствии с таблицей 7);

- значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах, мкг/кг.

Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности, содержащее не более двух значащих цифр и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

     12 Контроль правильности и прецизионности результатов измерений


Контроль правильности и прецизионности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6-2003 (пункт 6.2.3) с использованием контрольных карт Шухарта.

УДК 633.1:636.086.1:636.087.26:006.354

МКС 65.120
67.050
67.060

Ключевые слова: пищевые продукты, продовольственное и кормовое сырье, комбикорма, корма, микотоксины, метод определения содержания с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием




Закупки не найдены
Свободные
Р
Заблокированные
Р
Роль в компании Пользователь

Для продолжения необходимо войти в систему

После входа Вам также будет доступно:
  • Автоматическая проверка недействующих стандартов в закупке
  • Создание шаблона поиска
  • Добавление закупок в Избранное