Внимание! В период с 29.07.22 по 11.08.22 сервис будет находиться в режиме технического обслуживания. В этой связи может наблюдаться нестабильная работа. Приносим извинения за неудобства.
1
Доступно поисковых запросов: 1 из 2
Следующий пробный период начнётся: 17 августа 2022 в 10:55
Снять ограничение

ГОСТ 34176-2017

Препараты ферментные. Методы определения ферментативной активности эндо-Бетта-глюканазы
Недействующий стандарт
Проверено:  09.08.2022

Информация

Название Препараты ферментные. Методы определения ферментативной активности эндо-Бетта-глюканазы
Название английское Enzyme preparation. Methods of endo-в-glucanase ferment activity detection
Дата актуализации текста 01.01.2021
Дата актуализации описания 01.01.2021
Дата издания 07.09.2017
Дата введения в действие 01.07.2018
Область и условия применения Настоящий стандарт распространяется на ферментные препараты и устанавливает вискозиметрические и колориметрические методы определения ферментативной активности эндо-Бетта-глюканазы
Опубликован Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2017 год
Утверждён в Росстандарт

     
ГОСТ 34176-2017

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ


Методы определения ферментативной активности эндо--глюканазы



Enzyme preparations. Methods of endo--glucanase ferment activity detection



МКС 07.100.30

         65.120

Дата введения 2018-07-01

     

Предисловие


Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 7 июня 2017 г. N 99-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 августа 2017 г. N 991-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34176-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)


ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 12, 2019 год

Поправка внесена изготовителем базы данных

     1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на ферментные препараты и устанавливает вискозиметрические и колориметрические методы определения ферментативной активности эндо--глюканазы.

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты*

_______________

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.


ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 201-76 Тринатрийфосфат. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике**

_______________

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.


ГОСТ 5823-78 Реактивы. Цинк уксуснокислый 2-водный. Технические условия

ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 10028-81 Вискозиметры капиллярные стеклянные. Технические условия

ГОСТ 18481-81 Ареометры и цилиндры стеклянные. Общие технические условия

ГОСТ 20264.0-74 Препараты ферментные. Правила приемки и методы отбора проб*

_______________

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 57248-2016.


ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 гидролиз: Расщепление исходного соединения на более простые в присутствии молекул воды.

3.2 ферментативный гидролиз: Гидролиз высокомолекулярных соединений под воздействием катализаторов белковой природы - гидролитических ферментов (гидролаз, класс 3 [1]).

3.3 субстрат: Соединение или вещество, на которое воздействует данный фермент.

3.4 системные названия ферментов: Названия, указывающие природу химической реакции, катализируемой данным ферментом, в соответствии с современной классификацией ферментов (КФ), принятой Международной комиссией по ферментам [1].

3.5 эндо--глюканазы: Ферменты, катализирующие гидролиз внутренних связей -глюкана с неупорядоченным расщеплением молекулы на крупные фрагменты (олигосахариды).

Примечание - Ферменты эндо--глюканазы катализируют гидролиз внутренних связей -глюкана:

- эндо-1,4--глюканаза (системное название: 1,4--D-глюкан-4-глюкано-гидролаза, КФ 3.2.1.4); лихеиназа (1,3-1,4--D-глюкан-4-глюканогидролаза, КФ 3.2.1.73); эндо-1,3-1,4-глюканаза (1,3-(1,3;1,4)--D-глюкан 3(4)-глюканогидролаза, КФ 3.2.1.6); эндо-1,3--глюканаза (1,3--D-глюканглюканогидролаза, КФ 3.2.1.39) катализируют гидролиз -1, 3 и 1, 4 связей в цепи -глюканов;

- эндо-1,6--глюканаза (1,6--D-глюканглюканогидролаза, КФ 3.2.1.75) - 1:6 связи в цепи -глюканов;

- эндо-1,2--глюканаза (1,2--D-глюканглюканогидролаза, КФ 3.2.1.71) - 1:2 гликозидные связи глюкана.

3.6 -глюкан: Высокомолекулярное соединение, полимер глюкозы с -гликозидными связями, образующее с водой коллоидный раствор, которое используется в реакции как субстрат.

3.7 азо-ячменный -глюкан и бета-глюказим таблетки (AZCL-бета-глюкан): Высокоочищенные субстраты 1,3;1,4--D-глюкана с низкой вязкостью, связанные с хромофором (азурином).

     4 Требования безопасности и условия выполнения анализа

4.1 Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с которыми необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3 Электробезопасность при работе с электроустановками - по ГОСТ 12.1.019.

4.4 К проведению анализов допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже среднего технического образования, владеющие навыками проведения анализа и изучившие инструкции по эксплуатации используемой аппаратуры.

4.5 При выполнении анализов соблюдают следующие условия:

- температура окружающего воздуха

от 15°С до 30°С;

- относительная влажность воздуха

от 20% до 80%.

     

     5 Метод определения ферментативной активности эндо--глюканазы с использованием капиллярного вискозиметра Оствальда

5.1 Сущность метода

Метод определения ферментативной активности эндо--глюканазы с использованием вискозиметра Оствальда основан на количественном определении снижения относительной вязкости (повышения текучести) субстрата - раствора -глюкана - в результате деградации его под действием эндоглюканаз. Относительную вязкость (текучесть) определяют как отношение вязкости гидролизата субстрата к вязкости буферного раствора при той же температуре.

За единицу активности принимают такое количество фермента, которое в стандартных условиях (гидролиз в течение 10 мин при температуре 30°С) приводит к увеличению величины относительной текучести субстрата, равной 1 мин (ед. ГлА).

5.2 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, посуда и реактивы

5.2.1 Для определения ферментативной активности эндо--глюканазы применяют следующие средства измерений и вспомогательные устройства:

- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой погрешности не более ±0,001 г;

- pH-метр или универсальный иономер с диапазоном измерения от 0 до 14 ед. pH с погрешностью измерения не более ±0,1 ед. pH;

- секундомеры с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью не более ±1,5 с;

- сито с размером диаметра ячеек не более 1 мм;

- баню водяную лабораторную из прозрачного материала, обеспечивающую поддержание температуры нагревания 30°С с допускаемой погрешностью регулирования температуры не более ±0,1°С;

- баню водяную лабораторную, обеспечивающую температуру нагревания до 100°С с допускаемой погрешностью регулирования температуры не более ±1,0°С;

- вискозиметр Оствальда с размером диаметра капилляра 0,73 мм по ГОСТ 10028;

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный или механическую мельницу, обеспечивающую размалывание анализируемой пробы ферментного препарата до полного ее прохода через сито;

- мешалку магнитную любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин;

- центрифугу лабораторную любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее 4000 мин;

- холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 2°С до 8°С.

(Поправка. ИУС N 12-2019).

5.2.2 Для определения ферментативной активности эндо--глюканазы применяют следующие лабораторную посуду и материалы:

- воронки ВФ-1(2)-75-ПОР 500 ТХС по ГОСТ 25336;

- колбы конические Кн-1-25(100,500,1000)-14/23 ТС по ГОСТ 25336;

- колбы мерные 1(2)-25(50,100,200,250,300,500,1000)-2 по ГОСТ 1770;

- пипетки стеклянные по ГОСТ 29227;

- пипетки автоматические вместимостью от 0,1 до 5,0 см с наконечниками;

- стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ 19/9 и 24/10 по ГОСТ 25336;

- цилиндры 1-10(50,100,500)-1 по ГОСТ 1770;

- ступка и пестик по ГОСТ 9147.

5.2.3 При определении ферментативной активности -глюканазы применяют следующие реактивы:

- -глюкан из ячменя с содержанием основного вещества не менее 95%, (например, Sigma, кат. N G6517*);

_______________

* Данная информация не является рекламой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.


- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

- кислоту уксусную ледяную по ГОСТ 61, х.ч.;

- натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199, ч.д.а.;

- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962;

- образец эндо--глюканазы (образец сравнения) с активностью (3100±150) ед.ГлА/г (ед.ГлА/см), (например, Sigma, кат. N G4423*).

_______________

* Данная информация не является рекламой и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

5.2.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также вспомогательных устройств, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

5.3 Приготовление растворов

5.3.1 Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0,1 моль/дм с кислотностью 4,7 ед. pH

5.3.1.1 Приготовление раствора уксусной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1 дм вносят 5,7 см ледяной уксусной кислоты, добавляют приблизительно 300 см дистиллированной воды, перемешивают. Доводят до метки дистиллированной водой и снова перемешивают.

Срок хранения раствора в стеклянной посуде при комнатной температуре - не более 1 мес.

5.3.1.2 Приготовление раствора 3-водного уксуснокислого натрия

В мерную колбу вместимостью 1 дм вносят 13,6 г 3-водного уксуснокислого натрия и растворяют приблизительно в 300 см дистиллированной воды. Затем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.

5.3.1.3 Для приготовления ацетатного буферного раствора смешивают равные объемы растворов уксусной кислоты и 3-водного уксуснокислого натрия. Измеряют значение pH и при необходимости доводят кислотность раствора до 4,7 ед. pH одним из исходных растворов.

5.3.2 Приготовление субстрата - 0,4%-ного раствора -глюкана

В коническую колбу вместимостью 100 см вносят 400 мг -глюкана, добавляют 3 см этилового спирта. К суспензии добавляют приблизительно 30 см ацетатного буферного раствора (см. 5.3.1). Смесь нагревают в водяной бане при температуре 50°С при энергичном перемешивании до полного растворения -глюкана. При этом образуется мутный раствор. Колбу с раствором охлаждают до комнатной температуры, доливают ацетатным буферным раствором (см. 5.3.1) до 50 г (по массе) и тщательно перемешивают. При необходимости раствор осветляют центрифугированием при частоте вращения 4000 мин в течение 10-15 мин или фильтрованием через воронку со стеклянным фильтром.

Закупки не найдены
Свободные
Р
Заблокированные
Р
Роль в компании Пользователь

Для продолжения необходимо войти в систему

После входа Вам также будет доступно:
  • Автоматическая проверка недействующих стандартов в закупке
  • Создание шаблона поиска
  • Добавление закупок в Избранное