1
Доступно поисковых запросов: 1 из 2
Следующий пробный период начнётся: 02 октября 2022 в 22:44
Снять ограничение

ГОСТ EN 14663-2014

Продукция пищевая. Определение витамина В6 (включая гликозилированные формы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Действующий стандарт
Проверено:  24.09.2022

Информация

Название Продукция пищевая. Определение витамина В6 (включая гликозилированные формы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Дата актуализации текста 07.08.2016
Дата актуализации описания 01.01.2021
Дата издания 20.07.2016
Дата введения в действие 01.06.2017
Область и условия применения Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина В6 в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
Опубликован Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2016 год
Утверждён в Росстандарт


ГОСТ EN 14663-2014

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ

Определение витамина (включая гликозилированные формы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии


Foodstuffs. Determination of vitamin (including its glycosylated forms) by high performance liquid chromatography method



МКС 67.050

Дата введения 2017-06-01

     

Предисловие


Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт


(Поправка. ИУС N 6-2019), (Поправка. ИУС N 7-2019).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 июня 2016 г. N 733-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14663-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 14663:2005* "Продукты пищевые. Определение витамина (включая гликозилированные формы) с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии" [("Foodstuffs - Determination of vitamin (including its glycosylated forms) by HPLC", IDT].

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.


Европейский стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы" Европейского комитета по стандартизации (CEN).

При применении настоящего стандарта рекомендуется вместо ссылочного европейского стандарта использовать межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)


ВНЕСЕНЫ: поправка, опубликованная в ИУС N 6, 2019 год; поправка, опубликованная в ИУС N 7, 2019 год с учетом уточнения, опубликованного в ИУС 11-2019

Поправки внесены изготовителем базы данных



     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Витамин определяется как сумма пиридоксина, пиридоксаля, пиридоксамина, включая их фосфорилированные производные, а также -гликозилированные формы, в пересчете на пиридоксин.

Настоящий метод был успешно проверен на манной крупе с молоком (детское питание), картофельном пюре, овощах с ветчиной (типичная пищевая продукция) и мультивитаминном напитке в диапазоне концентраций от 0,034 мг/100 г до 1,210 мг/100 г.

     2 Нормативные ссылки


Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный стандарт*. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).

________________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода


Производные витамина (пиридоксаль, пиридоксамин и пиридоксин) извлекают из пищевой продукции путем кислотного гидролиза, затем подвергают ферментативному воздействию: дефосфорилируют, используя кислую фосфатазу, и дегликозилируют, используя -глюкозидазу.

Полученные производные витамина разделяют и количественно определяют методом ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием ([1], [2]).

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

В ходе анализа используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты в соответствии с EN ISO 3696 или бидистиллированную воду.

4.2 Фосфат калия двузамещенный, массовая доля ()99,9%.

4.3 Ацетат натрия безводный, ()99,0%.

4.4 Трихлоруксусная кислота (ТХУ), ()99,0%.

4.5 Раствор ацетата натрия молярной концентрацией () = 2,5 моль/дм

205 г ацетата натрия (см. 4.3) растворяют в 1 дм воды.

4.6 Реагент послеколоночный (дополнительно), раствор с концентрацией () = 0,15 моль/дм.

Растворяют 34,2 г фосфата калия двузамещенного (см. 4.2) в воде, доводят до 1000 см, перемешивают и дегазируют.

4.7 Соляная кислота, (HCI) = 1 моль/дм.

4.8 Соляная кислота, (HCI) = 0,1 моль/дм.

4.9 Соляная кислота, (HCI) = 0,2 моль/дм.

4.10 Серная кислота, () = 1 моль/дм.

4.11 Эфир петролейный, диапазон кипения от 40°С до 60°С.

4.12 Фосфатаза кислая из картофеля. Ферментативная активность составляет около 5,3 U/мг.

_______________

U - данная единица измерения (международная или стандартная единица) определяется количеством фермента, который катализирует трансформацию 1 мкмоль субстрата в минуту при стандартных условиях.


Необходимо, чтобы используемый фермент с положительным результатом проходил проверку ферментативной активности согласно 4.13.2 (более подробная информация приведена в [2], [7]).

4.13 Раствор кислой фосфатазы

4.13.1 Общие положения

Растворяют 60 мг кислой фосфатазы (см. 4.12) в 10 см воды в конической колбе, перемешивая в течение 2 мин.

Раствор готовят в день проведения анализа.

4.13.2 Проверка ферментативной активности кислой фосфатазы

Взвешивают 10 г свинины, 5 г картофельного пюре или 5 г муки из цельного зерна в конической колбе и экстрагируют кислотой, как описано в 6.2.1. Добавляют к 12,5 см раствора экстрагированной пробы 1 см раствора кислой фосфатазы (см. 4.13.1) и опционально 1 см раствора -глюкозидазы (см. 4.15) и перемешивают. Инкубируют раствор в течение не менее 12 ч или в течение ночи при температуре 37°С при постоянном перемешивании. Повторяют эту операцию с двойным количеством раствора кислой фосфатазы.

Определяют массовую концентрацию витаминов в соответствии с 6.6. Ферментативная активность используемого фермента считается достаточной, если значения массовой концентрации соединений витамина в обоих растворах пробы эквивалентны. На хроматограмме должен отсутствовать пик фосфата пиридоксамина.

Примечание - Для межлабораторного испытания использовали кислую фосфатазу производства Sigma Nr Р 3752.

_______________

Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой указанного продукта со стороны CEN. Допускается использовать аналогичную продукцию, если она позволяет получать сопоставимые результаты.

4.14 -глюкозидаза из миндаля с ферментативной активностью приблизительно 3,2 U/мг

Необходимо, чтобы используемый фермент с положительным результатом проходил проверку ферментативной активности согласно 4.15.2 (более подробная информация приведена в [2], [7]).

4.15 Раствор -глюкозидазы

4.15.1 Общие положения

Растворяют 100 мг -глюкозидазы (см. 4.14) в 10 см воды в конической колбе, перемешивая в течение 2 мин.

Раствор готовят в день проведения анализа.

4.15.2 Проверка ферментативной активности -глюкозидазы

Взвешивают 10 г свинины, 5 г картофельного пюре или 5 г муки из цельного зерна в конической колбе и экстрагируют кислотой, как описано в 6.2.1. Добавляют к 12,5 см раствора экстрагированной пробы 1 см раствора кислой фосфатазы (см. 4.13.1) и 1 см раствора -глюкозидазы (см. 4.15.1) и перемешивают. Инкубируют раствор в течение не менее 12 ч или в течение ночи при температуре 37°С при постоянном перемешивании. Данную операцию повторяют с двойным количеством раствора -глюкозидазы.

Определяют массовую концентрацию витаминов в соответствии с 6.6. Ферментативная активность используемого фермента считается достаточной, если значения массовой концентрации соединений витамина в обоих растворах пробы эквивалентны. На хроматограмме должен отсутствовать пик фосфата пиридоксамина.

Примечание - Для межлабораторного испытания использовали кислую фосфатазу Sigma Nr G-0395.

_______________

Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой указанного продукта со стороны CEN. Допускается использовать аналогичную продукцию, если она позволяет получать сопоставимые результаты.

4.16 Подвижная фаза для ВЭЖХ (серная кислота, () = 0,015 моль/дм, содержащая 0,005 моль/дм трихлоруксусной кислоты)

(817±5) мг трихлоруксусной кислоты (см. 4.4) растворяют в 15 см серной кислоты молярной концентрацией 1 моль/дм (см. 4.10), переливают в мерную колбу вместимостью 1000 см, объем содержимого в колбе доводят до метки водой, перемешивают и дегазируют.

4.17 Силиконовое масло для удаления пены.

4.18 Образцы сравнения

4.18.1 Общие положения

Пиридоксамин (РМ), пиридоксаль (PL) и пиридоксин (PN) могут быть получены у различных поставщиков. Чистота образцов сравнения может варьироваться, поэтому необходимо определить их концентрацию и чистоту (см. 4.19.4 и 4.20.7).

4.18.2 Пиридоксамина (РМ) дигидрохлорид, ()98%.

4.18.3 Пиридоксаля (PL) гидрохлорид, ()98%.

4.18.4 Пиридоксина (PN) гидрохлорид, ()98%.

4.19 Исходные растворы

4.19.1 Исходный раствор пиридоксамина (РМ), массовой концентрацией (РМ) приблизительно 500 мкг/см

71,7 мг пиридоксамина дигидрохлорида (см. 4.18.2) растворяют в соляной кислоте молярной концентрацией 0,1 моль/дм (см. 4.8) в мерной колбе вместимостью 100 см, объем содержимого в колбе доводят до метки этим же раствором соляной кислоты.

Срок хранения раствора - 1 неделя при температуре 4°С или 2 мес при температуре минус 18°С.

4.19.2 Исходный раствор пиридоксаля (PL) массовой концентрацией (PL) приблизительно 500 мкг/см

60,9 мг пиридоксаля гидрохлорида (см. 4.18.3) растворяют в соляной кислоте молярной концентрацией 0,1 моль/дм (см. 4.8) в мерной колбе вместимостью 100 см, объем содержимого в колбе доводят до метки этим же раствором соляной кислоты.

Срок хранения раствора - 1 неделя при температуре 4°С или 2 мес при температуре минус 18°С.

4.19.3 Исходный раствор пиридоксина (PN), массовой концентрацией (PN) приблизительно 500 мкг/см

60,8 мг пиридоксина гидрохлорида (см. 4.18.4) растворяют в соляной кислоте молярной концентрацией 0,1 моль/дм (см. 4.8) в мерной колбе вместимостью 100 см, объем содержимого в колбе доводят до метки этим же раствором соляной кислоты.

Срок хранения раствора - 1 неделя при температуре 4°С или 2 мес при температуре минус 18°С.

4.19.4 Определение концентраций растворов

Отбирают пипеткой 1 см исходного раствора пиридоксамина (см. 4.19.1), пиридоксаля (см. 4.19.2) и пиридоксина (см. 4.19.3) соответственно в мерные колбы вместимостью 50 см и содержимое колб доводят до метки 0,1 моль/дм HCI (см. 4.8). Измеряют оптическую плотность растворов в кювете из кварцевого стекла с толщиной поглощающего слоя 1 см при длинах волн, соответствующих максимумам поглощения относительно 0,1 моль/дм HCI (см. таблицу 1).


Таблица 1 - Примеры молярных коэффициентов поглощения соединений витамина

Соединение

Растворитель

, ммоль см

, г/моль

F

PM·2HCI

0,1 моль/дм HCI, рН ~1

292

8,2

241,1

0,698

PL·HCI

0,1 моль/дм HCI, рН ~1

288

9,0

203,6

0,821

PN·HCl

0,1 моль/дм HCI, рН ~1

291

8,6

205,6

0,823

PM·2HCI - Пиридоксамина дигидрохлорид (4.18.2).

PL·HCI - Пиридоксаля гидрохлорид (4.18.3).

PN·HCI - Пиридоксина гидрохлорид (4.18.4).


Массовую концентрацию пиридоксамина, пиридоксаля и пиридоксина в исходных растворах , мкг/см, вычисляют, используя молярный коэффициент поглощения, по формуле

,                                                (1)


где - значение оптической плотности растворов пиридоксамина, пиридоксаля и пиридоксина при длинах волн, соответствующих максимумам поглощения (см. таблицу 1);

- молярная масса образцов сравнения РМ, PL или PN соответственно согласно таблице 1, г/моль;

- коэффициент разбавления, см (в данном случае 50 см);

- коэффициент для вычисления доли свободных форм соединений витамина ;

- молярный коэффициент поглощения РМ, PL или PN при соответствующем рН согласно таблице 1, ммоль см.

Данные значения массовой концентрации используют для вычисления точных концентраций веществ, приведенных в пунктах 4.19.1-4.19.3 и 4.20.1-4.20.6.

4.20 Стандартные растворы

Закупки не найдены
Свободные
Р
Заблокированные
Р
Роль в компании Пользователь

Для продолжения необходимо войти в систему

После входа Вам также будет доступно:
  • Автоматическая проверка недействующих стандартов в закупке
  • Создание шаблона поиска
  • Добавление закупок в Избранное