1
Доступно поисковых запросов: 1 из 2
Следующий пробный период начнётся: 13 октября 2022 в 06:32
Снять ограничение

ГОСТ Р 57221-2016

Дрожжи кормовые. Методы испытаний
Действующий стандарт
Проверено:  05.10.2022

Информация

Название Дрожжи кормовые. Методы испытаний
Название английское Nutrient yeast. Test methods
Дата актуализации текста 01.01.2021
Дата актуализации описания 01.01.2021
Дата издания 06.04.2020
Дата введения в действие 01.05.2017
Область и условия применения Настоящий стандарт распространяется на все виды кормовых дрожжей и других белковых кормовых продуктов микробного синтеза и устанавливает обор проб и методы испытаний
Опубликован Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2016 год
Утверждён в Росстандарт

     
     ГОСТ Р 57221-2016

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ДРОЖЖИ КОРМОВЫЕ

Методы испытаний

Nutrient yeast. Test methods

     

ОКС 65.120

Дата введения 2017-05-01

     

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Некоммерческим партнерством "Координационно-информационный центр содействия предприятиям по вопросам безопасности химической продукции" при участии ООО "Центр промышленной биотехнологии имени княгини Е.Р.Дашковой"

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 326 "Биотехнологии"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 7 ноября 2016 г. N 1602-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

     1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на все виды кормовых дрожжей и других белковых кормовых продуктов микробного синтеза и устанавливает обор проб и методы испытаний.

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 9 Аммиак водный технический. Технические условия

ГОСТ 245 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия*

________________

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия. - Примечание изготовителя базы данных.


ГОСТ 334 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 427 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 435 Реактивы. Марганец (II) сернокислый 5-водный. Технические условия

ГОСТ 450 Кальций хлористый технический. Технические условия

ГОСТ 860 Олово. Технические условия

ГОСТ 975 Глюкоза кристаллическая гидратная. Технические условия

ГОСТ 1027 Свинец (II) уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1467 Кадмий. Технические условия

ГОСТ 1770 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 1973 Ангидрид мышьяковистый. Технические условия

ГОСТ 2184 Кислота серная техническая

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры (с Изменениями N 1-4)

ГОСТ 2768 Ацетон технический. Технические условия

ГОСТ 3022 Водород технический. Технические условия

ГОСТ 3778 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия*

 ________________

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: Свинец. Технические условия. - Примечание изготовителя базы данных.


ГОСТ 4108 Барий хлорид 2-водный. Технические условия

ГОСТ 4145 Реактивы. Калий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4146 Реактивы. Калий надсернокислый. Технические условия

ГОСТ 4160 Медь II сернокислая 5-водная. Технические условия*

________________

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: Реактивы. Калий бромистый. Технические условия. - Примечание изготовителя базы данных.


ГОСТ 4165 Медь II сернокислая 5-водная. Технические условия

ГОСТ 4166 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4172 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный. Технические условия

ГОСТ 4174 Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4198 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4204 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4208 Реактивы. Соль закиси железа и аммония двойная сернокислая (соль Мора). Технические условия

ГОСТ 4209 Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия

ГОСТ 4217 Реактивы. Калий азотнокислый. Технические условия

ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4236 Реактивы. Свинец (II) азотнокислый. Технические условия

ГОСТ 4328 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4386 Вода питьевая. Методы определения массовой концентрации фторидов

ГОСТ 4456 Реактивы. Кадмий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4461 Реактивы. Кислота азотная. Технические условия

ГОСТ 4463 Реактивы. Натрий фтористый. Технические условия

ГОСТ 5230 Реактивы. Ртути окись желтая. Технические условия

ГОСТ 5456 Реактивы. Гидроксиламина гидрохлорид. Технические условия

ГОСТ 5457 Ацетилен растворенный и газообразный технический. Технические условия

ГОСТ 5821 Реактивы. Кислота сульфаниловая. Технические условия

ГОСТ 5833 Реактивы. Сахароза. Технические условия

ГОСТ 5962 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ 6038 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия

ГОСТ 6217 Уголь активный древесный дробленый. Технические условия

ГОСТ 6259 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 6672 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6691 Реактивы. Карбамид. Технические условия

ГОСТ 8677 Реактивы. Кальций оксид. Технические условия

ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9284 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 9293 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 9656 Реактивы. Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 10157 Аргон газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 10444.12 Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов

ГОСТ 10444.1 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 10485 Реактивы. Методы определения примеси мышьяка

ГОСТ 10929 Реактивы. Водорода пероксид. Технические условия

ГОСТ 10930 Реактивы. Фурфурол. Технические условия

ГОСТ 11773 Реактивы. Натрий фосфорно-кислый двузамещенный. Технические условия

ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13805 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

ГОСТ 14261 Кислота соляная особой чистоты. Технические условия

ГОСТ 17206 Агар микробиологический. Технические условия

ГОСТ 17299 Спирт этиловый технический. Технические условия

ГОСТ 17626 Казеин технический. Технические условия

ГОСТ 17792 Электрод сравнения хлорсеребряный насыщенный образцовый 2-го разряда

ГОСТ 18963 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа

ГОСТ 20015 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 20288 Реактивы. Углерод четыреххлористый. Технические условия

ГОСТ 20490 Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия

ГОСТ 20730 Питательные среды. Бульон мясопептонный (для ветеринарных целей). Технические условия

ГОСТ 22180 Реактивы. Кислота щавелевая. Технические условия

ГОСТ 22280 Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия

ГОСТ 24363 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25706 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования

ГОСТ 25794.1 Реактивы. Методы приготовления титрованных растворов для кислотно-основного титрования

ГОСТ 27068 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия

ГОСТ 29227 Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29251 Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Отбор проб

3.1 Для проведения испытаний от партии кормовых дрожжей отбирают точечные пробы по ГОСТ 13496.0.

3.2 Из точечных проб составляют объединенную пробу, помещают ее в чистую тару и перемешивают. В тару вкладывают этикетку с указанием наименования продукта, номера партии, даты отбора точечных проб, наименования предприятия-изготовителя.

3.3 Из объединенной пробы выделяют среднюю пробу по ГОСТ 13496.0, делят ее путем квартования на две равные части и помещают в чистые сухие банки с плотно закрывающимися крышками или пробками. Одну из них используют для анализов, а другую опечатывают или пломбируют и хранят не менее 2 мес на случай проведения контрольных испытаний при разногласиях в оценке качества кормовых дрожжей.

3.4 К банке со средней пробой прикрепляют этикетку, на которой должны быть обозначены:

- наименование продукта;

- наименование предприятия-изготовителя;

- номер партии;

- дата отбора пробы и подпись лица, отобравшего пробу.

3.5 Для испытаний по микробиологическим показателям пробы отбирают в стерильную посуду. Все оборудование, с помощью которого отбирают пробы, должно быть простерилизовано в лабораторных условиях фламбированием (протиранием ватой, смоченной спиртом, с последующим обжиганием на огне) или в сушильном шкафу в течение 1,5 ч при температуре 150-170°C.

3.6 Масса объединенной пробы для испытаний по микробиологическим показателям должна быть не менее 1 кг.

3.7 Допускается для испытаний по всем показателям качества кормовых дрожжей отбирать по 3.2 одну объединенную пробу массой не менее 5 кг, из которых 1 кг используют для испытания кормовых дрожжей по микробиологическим показателям.

     4 Подготовка проб к испытаниям

4.1 Часть средней пробы (около 400 г) просеивают через штампованное сито или решетное полотно с ячейками диаметром 0,2-0,3 мм. Остаток на сите измельчают на лабораторной мельнице и просеивают до тех пор, пока весь остаток не пройдет через сито. Просеянный продукт насыпают в тару вместимостью 0,5 дм с плотно закрывающейся крышкой или пробкой и используют для проведения испытания.

Гранулированный продукт перед просеиванием измельчают.

4.2 Для определения массовой доли сырого протеина и белка по Барнштейну продукт измельчают до пылеобразного состояния.

4.3 Для проведения испытаний по микробиологическим показателям гранулированный продукт растирают в фарфоровой ступке по ГОСТ 9147. Ступку и пестик перед использованием стерилизуют фламбированием.

     5 Определение внешнего вида, цвета и запаха

5.1 Для определения внешнего вида и цвета навеску продукта массой около 250 г рассыпают на белую чистую поверхность и рассматривают при естественном свете.

5.2 Запах определяют органолептически.

     6 Метод определения массовой доли влаги


Сущность метода заключается в высушивании навески продукта до постоянной массы при установленных температуре и времени; массовую долю влаги определяют как отношение потери в массе после высушивания к массе исходной навески продукта.

6.1 Аппаратура и реактивы

__________________

Во всех методах при проведении испытаний допускается использовать импортные аппаратуру, материалы и реактивы с характеристиками не ниже отечественных аналогов.


Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г - по ГОСТ 22280.

Шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры (130±5)°С.

Эксикатор - по ГОСТ 25336.

Кислота серная техническая - по ГОСТ 2184.

Стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ-24/10 или СВ-34/12 - по ГОСТ 25336 или стаканчики металлические для высушивания, поставляемые с сушильными шкафами СЭШ-1 или СЭШ-3М.

Щипцы тигельные.

Бюкс - по ГОСТ 25336.

Кальций хлористый технический - по ГОСТ 450 или кальций хлористый обезвоженный, прокаленный.

6.2 Подготовка проб к испытанию

Проводят заправку эксикатора 96% серной кислотой - по ГОСТ 2184.

Проводят предварительное высушивание и взвешивание бюксы.

6.3 Проведение испытания

Во взвешенную бюксу помещают 2-4 г продукта, разравнивая его равномерным слоем по дну бюксы. Бюксу с продуктом закрывают крышкой и взвешивают.

Открытую бюксу и крышку от нее помещают в сушильный шкаф, нагретый до температуры (130±5)°C, и высушивают 40 мин. По истечении 40 мин бюксу с помощью тигельных щипцов закрывают крышкой, вынимают из сушильного шкафа и ставят в эксикатор для охлаждения до комнатной температуры. Затем бюксу с закрытой крышкой взвешивают. Все результаты взвешиваний записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

Проводят два параллельных определения.

6.4 Обработка результатов

Массовую долю влаги (W) в процентах вычисляют по формуле:

,                                                       (1)

     
где m - масса бюксы с навеской до высушивания, г;


m - масса бюксы с навеской после высушивания, г;

m - масса пустой бюксы, г.

Результат округляют до второго десятичного знака. Из результатов двух параллельных определений вычисляют среднее арифметическое значение с тем же числом знаков после запятой и определяют расхождение между каждым результатом и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 5%, округленных до целого числа.

За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, которое округляют до первого десятичного знака.

Допускаемое относительное расхождение между окончательными результатами, полученными в разных условиях (в разных лабораториях, в разное время, при работе с разным оборудованием, разными материалами и реактивами), вычисляют следующим образом: из окончательных результатов испытаний, полученных в разных условиях, определяют среднее арифметическое значение, которое округляют до первого десятичного знака. Далее определяют расхождение между каждым окончательным результатом испытания и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 10%, округленных до целого числа.

     7 Метод определения массовой доли золы


Сущность метода заключается в сожжении навески продукта и прокаливании полученного остатка до постоянной массы.

7.1 Аппаратура и реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г - по ГОСТ 22280.

Печь муфельная, обеспечивающая нагрев до 800°С, с регулятором температуры.

Тигли низкие 4 или 5 - по ГОСТ 9147, или фарфоровые чашки диаметром 30-40 мм, или тигли и чашки из кварцевого стекла, платины.

Эксикатор - по ГОСТ 25336.

Щипцы тигельные.

Кальций хлористый технический - по ГОСТ 450 или кальций хлористый обезвоженный, прокаленный.

7.2 Подготовка к испытанию

Чистый тигель прокаливают в муфельной печи при температуре (600±20)°C в течение 5 ч, затем тигель переносят в эксикатор и после охлаждения до комнатной температуры взвешивают.

Тигель вновь помещают на 1 ч в муфельную печь для повторного прокаливания при той же температуре и после охлаждения в эксикаторе до комнатной температуры взвешивают. Если его масса изменилась более чем на 0,0004 г, прокаливание повторяют. Прокаливание считают законченным, если разница между двумя последовательными взвешиваниями составит не более 0,0004 г.

Все результаты взвешиваний записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

Подготовленные тигли хранят в эксикаторе над хлористым кальцием.

7.3 Проведение испытания

В предварительно доведенный до постоянной массы и взвешенный тигель помещают 0,8-1,0 г продукта. Тигель с продуктом взвешивают и ставят у открытой дверцы муфельной печи, нагретой до температуры (600±20)°C. По мере прогревания тигля с продуктом происходит интенсивное выделение паров и газов, которые не должны воспламеняться; если воспламенение произошло, испытание повторяют.

После обугливания продукта и прекращения выделения паров и газов тигель с навеской переставляют в зону более высокой температуры и дверцу муфельной печи закрывают. Прокаливание проводят в течение 4-5 ч, затем тигель вынимают, переносят в эксикатор и после охлаждения до комнатной температуры взвешивают.

Тигель вновь ставят в муфельную печь и проводят повторное прокаливание в течение 1 ч. После охлаждения в эксикаторе тигель с золой взвешивают. Прокаливание повторяют до достижения постоянной массы. Массу считают постоянной, если разница между двумя последовательными взвешиваниями составит не более 0,0004 г. Если при очередном прокаливании масса увеличится, то за конечную величину принимают наименьшую массу предыдущего взвешивания. Все результаты взвешиваний записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

Проводят два параллельных определения.

7.4 Обработка результатов

Массовую долю золы (X) в процентах вычисляют по формуле:

,                                              (2)

     
где m - масса тигля с золой, г;


m - масса пустого тигля, г;

m - масса тигля с навеской до озоления, г;

W - массовая доля влаги продукта, %.

Результат округляют до второго десятичного знака. Из результатов двух параллельных определений вычисляют среднее арифметическое значение с тем же числом знаков после запятой и определяют расхождение между каждым результатом и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 5%, округленных до целого числа.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, которое округляют до первого десятичного знака.

Допускаемое относительное расхождение между окончательными результатами, полученными в разных условиях (в разных лабораториях, в разное время, при работе с разным оборудованием, с разными материалами и реактивами), вычисляют следующим образом: из окончательных результатов испытаний, полученных в разных условиях, определяют среднее арифметическое значение, которое округляют до первого десятичного знака. Далее определяют расхождение между каждым окончательным результатом испытания и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 10%, округленных до целого числа.

     8 Метод определения массовой доли сырого протеина


Сущность метода заключается в восстановлении азота органических соединений при минерализации продукта серной кислотой до аммиака, титрометрическом определении аммиака и пересчете его количества на содержание сырого протеина.

8.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные технические любого типа.

Весы лабораторные 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 1 кг - по ГОСТ 22280.

Устройства нагревательные любого типа: электрические, инфракрасные, газовые, снабженные устройствами для регулирования степени нагрева.

Колба Кьельдаля 2-250-29 ТХС или 2-500-29 ТХС - по ГОСТ 25336.

Втулка Кьельдаля или воронка лабораторная В-36-80 - по ГОСТ 25336.

Пробирка П-2-16-180, или П-2-19-180, или П-2-21-200 - по ГОСТ 25336.

Цилиндры мерные 1-10; 1-25 или 3-25; 1-100 или 3-100 - по ГОСТ 1770.

Палочка стеклянная диаметром 5-6 мм.

Прибор для отгонки аммиака (рисунки 1, 2).

Колба круглодонная К-1-500-29/32 ТС или К-1-1000-29/32 ТС, или колба плоскодонная П-1-500-29/32 ТС или П-1-1000-29/32 - по ГОСТ 25336.

Переход П2П-29/32-14/23-14/23 - по ГОСТ 25336.

Каплеуловитель КО-14/23-100 ХС - по ГОСТ 25336.

Холодильник ХПТ-1-300-14/23 ТС, или ХПТ-1-400-14/23 ТС, или ХШ-1-200-14/23 ХС, или ХШ-1-300-14/23 ХС, или ХШ-1-400-14/23 ХС - по ГОСТ 25336.

Муфта МПО-14/23 ТС - по ГОСТ 25336 с удлиненным до 160-170 мм отводом.

Колба Кн-2-250-34 ТХС - по ГОСТ 25336.

Воронка делительная ВД-2-100 ХС - по ГОСТ 25336.

Столик подъемный типа СПД.

Кольца резиновые.

Пипетки 2-1-50 или 2-2-50 - по ГОСТ 29227.

Бюретки 1-1-50 или 1-2-50 - по ГОСТ 29251 или в исполнениях 2, 3, 4, 5.

Ступка фарфоровая диаметром 90 или 110 мм с пестиком - по ГОСТ 9147.

Промывалка для дистиллированной воды.

Капельница для индикатора.

Бумага индикаторная универсальная.

Асбест листовой.

Кислота серная - по ГОСТ 4204, х.ч., концентрированная и раствор концентрации c(1/2HSO)=0,1 моль/дм (0,1 н.); готовят из стандарт-титра или по ГОСТ 25794.1 из концентрированной кислоты.

Натрия гидроокись - по ГОСТ 4328, водный раствор с массовой долей 30-40% и раствор концентрации c(NaOH)=0,1 моль/дм (0,1 н.); готовят из стандарт-титра или по ГОСТ 25794.1 из натрия гидроокиси.

Калий сернокислый - по ГОСТ 4145 любой квалификации или калий надсернокислый - по ГОСТ 4146, х.ч. или ч.д.а.

Медь (II) сернокислая 5-водная - по ГОСТ 4165 любой квалификации.

Селен металлический, ч.

     

1 - подъемный столик; 2 - приемная колба; 3 - удлиненная муфта; 4 - холодильник; 5 - каплеуловитель; 6 - переход; 7 - делительная воронка; 8 - отгонная колба; 9 - нагревательное устройство

Рисунок 1 - Прибор для отгонки аммиака


1 - подъемный столик; 2 - приемная колба; 3 - нагревательное устройство; 4 - удлиненная муфта; 5 - отгонная колба; 6 - холодильник; 7 - каплеуловитель; 8 - делительная воронка; 9 - переход; 10 - изоляция паропроводящей трубки; 11 - отвод с зажимом; 12 - парообразователь

Рисунок 2 - Прибор для отгонки аммиака с водяным паром


Водорода перекись - по ГОСТ 10929, раствор с массовой долей 30%.

Кислота борная - по ГОСТ 9656, ч.д.а. или х.ч., раствор с массовой долей 4%.

Метиловый красный, спиртовой раствор с массовой долей 0,2 и 0,4%.

Метиленовый голубой, спиртовой раствор с массовой долей 0,2%.

Бромкрезоловый зеленый, спиртовой раствор с массовой долей 0,1%.

Спирт этиловый ректификованный технический - по ГОСТ 18300 или спирт этиловый технический - по ГОСТ 17299.

Вода дистиллированная.

8.2 Подготовка к испытанию

8.2.1 Приготовление твердых катализаторов

Катализатор 1. Смешивают 10 весовых частей сернокислой меди, 100 весовых частей сернокислого калия и две весовые части селена, смесь тщательно растирают в ступке до получения однородного мелкозернистого порошка.

Катализатор 2. Смешивают одну весовую часть сернокислой меди и три весовые части сернокислого калия, смесь тщательно растирают в ступке до получения однородного мелкозернистого порошка.

Катализатор 3. Смешивают 10 весовых частей сернокислой меди, 100 весовых частей сернокислого калия, смесь тщательно растирают в ступке до получения однородного мелкозернистого порошка.

Допускается заменять сернокислый калий надсернокислым калием в том же количестве.

Катализаторы хранят в склянках (стеклянных или тефлоновых) с плотно закрывающимися крышками.

8.2.2 Приготовление серной кислоты, содержащей селен в качестве катализатора

Аморфный или растертый в порошок селен из расчета 0,5 г на 100 см концентрированной серной кислоты растворяют при нагревании в термостойкой колбе до обесцвечивания раствора.

Серную кислоту с растворенным селеном хранят в склянках с плотно закрывающимися пробками.

8.2.3 Приготовление смешанных индикаторов

Индикатор 1. Смешивают равные объемы 0,4-процентного спиртового раствора метилового красного и 0,2-процентного спиртового раствора метиленового голубого.

Индикатор 2. Смешивают один объем 0,2-процентного спиртового раствора метилового красного и три объема 0,1-процентного спиртового раствора бромкрезолового зеленого.

Индикаторы хранят в склянках из темного стекла или в защищенном от света месте.

8.2.4 Определение поправки к титру раствора гидроокиси натрия концентрации с(NaOH)=0,1 моль/дм (0,1 н.)

Поправка к титру представляет собой отношение эквивалентной концентрации приготовленного раствора к заданной концентрации.

Для определения этой поправки в три конические колбы вместимостью до 250 см пипеткой вносят по 20 см раствора серной кислоты, приготовленного из стандарт-титра, концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.), добавляют 5-6 капель индикатора 1 или 2 и титруют приготовленным раствором гидроокиси натрия до перехода окраски индикатора от розовой до светло-серой (одна капля избытка гидроокиси натрия приводит к образованию зеленой окраски).

Из результатов трех параллельных титрований вычисляют среднее арифметическое.

Эквивалентную концентрацию раствора гидроокиси натрия (N) в молях на кубический дециметр вычисляют по формуле:

,                                                          (3)


где N - концентрация раствора серной кислоты, приготовленного из стандарт-титра, 0,1 моль/дм (0,1 н.);

V - объем раствора серной кислоты, приготовленный из стандарт-титра, взятый для титрования, см;

V - объем раствора гидроокиси натрия, израсходованный на титрование взятого количества серной кислоты, см.

Поправку (K) к титру раствора гидроокиси натрия вычисляют по формуле:

,                                                                 (4)


где 0,1 - заданная эквивалентная концентрация раствора гидроокиси натрия 0,1 моль/дм (0,1 н.).

8.3 Проведение испытания

8.3.1 Минерализация образца

В длинную сухую пробирку, свободно входящую в горло колбы Кьельдаля, насыпают (0,5±0,02) г продукта и взвешивают. Затем продукт осторожно высыпают в сухую колбу Кьельдаля, возможно глубже опуская пробирку в горло колбы. Пробирку вновь взвешивают. По разнице между первым и вторым взвешиваниями определяют массу навески продукта, взятую для анализа. Все результаты взвешиваний записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

Для внесения в колбу Кьельдаля навески продукта можно пользоваться следующим приемом. Перед тем как в пробирку насыпают продукт, на нее надевают два резиновых кольца на расстоянии 6-8 см. Затем в пробирку насыпают продукт, пробирку взвешивают, помещая ее на весах в стакан или подвешивая с помощью проволочного кольца. После того как произведено взвешивание, пробирку держат открытым концом вверх и под кольца подсовывают стеклянную палочку длиной на 4-5 см больше, чем длина колбы Кьельдаля, в которой будет производиться сжигание. Затем одной рукой на пробирку надевают перевернутую вверх дном колбу Кьельдаля так, чтобы дно колбы оказалось на расстоянии 1-2 см от открытого конца пробирки. Далее колбу с находящейся в ней пробиркой переворачивают дном вниз, удерживая пробирку за стеклянную палочку. При этом продукт высыпается непосредственно на дно колбы и не попадает на стенки. После того как продукт высыпался, пробирку вытягивают из колбы, переворачивают, палочку из-под резиновых колец вынимают и пробирку вместе с резиновыми кольцами вновь взвешивают.

Минерализацию проводят одним из следующих способов.

Способ 1. В колбу с навеской добавляют 2-3 г катализатора 1 или 2 и приливают 25 см концентрированной серной кислоты.

Способ 2. В колбу с навеской приливают 10 см раствора перекиси водорода с массовой долей перекиси водорода 30% и 25 см концентрированной серной кислоты. Для ускорения минерализации рекомендуется использовать серную кислоту, содержащую селен, приготовленную по п.6.2.

Способ 3. Добавляют в колбу 8 г катализатора. После прибавления катализатора осторожно приливают 15 см концентрированной серной кислоты.

Серную кислоту приливают по стенкам колбы, одновременно смывая на дно колбы частицы катализатора и продукта, оставшиеся на стенках колбы.

После добавления всех реактивов содержимое колбы тщательно перемешивают легкими круговыми движениями колбы, обеспечивая полное смешение навески продукта с кислотой.

После этого колбу устанавливают на нагреватель; допускается перед установкой на нагреватель колбу оставить на 1,5-2 ч при комнатной температуре для предварительного окисления продукта.

На нагреватель колбу ставят так, чтобы ее ось была наклонена к вертикали под углом 30-45°. В горло колбы вставляют втулку или маленькую воронку для уменьшения испарения кислоты. Минерализацию проводят под тягой, так как при этом процессе происходит выделение сернистого ангидрида.

В начале минерализации обычно происходит образование пены, поэтому нагрев сначала производят умеренно, чтобы предотвратить выброс пены из колбы, по мере прекращения пенообразования нагрев усиливают, пока жидкость не станет равномерно кипеть. Нагрев считают нормальным, если жидкость кипит, а пары конденсируются около середины - двух третей горла колбы.

Избегают перегрева стенок колбы выше уровня жидкости. Если используют нагрев в пламени горелки, то во избежание такого перегрева колбу помещают на лист асбеста с отверстием по диаметру несколько меньшим, чем диаметр колбы на уровне жидкости.

При минерализации по способу 1 допускается производить обработку продукта перекисью водорода, как и при минерализации по способу 2.

Кроме того, для ускорения минерализации допускается добавлять перекись водорода по ходу процесса. В этом случае колбу снимают с нагревателя, дают ей немного остыть и добавляют к содержимому колбы перекись водорода небольшими порциями, почти по каплям, давая жидкости стекать по стенке колбы. Как только стекающая порция перекиси водорода коснется жидкости, содержимое колбы перемешивают круговыми движениями колбы. Следующую порцию перекиси водорода добавляют только после того, как кончится бурная реакция окисления. Внесение перекиси водорода как вначале, до добавления кислоты, так и потом, по ходу минерализации, проводят под тягой, следя за тем, чтобы отверстие горла колбы было направлено в сторону от исполнителя и других работающих.

Во время минерализации содержимое колбы периодически помешивают круговыми движениями колбы. Если на стенках колбы выше уровня жидкости оказались частицы продукта или брызги кислоты, их смывают при помешивании в основной объем жидкости.

По ходу минерализации жидкость в колбе постепенно осветляется, и когда она станет прозрачной, обесцветится или будет иметь зеленоватый или голубоватый оттенок, минерализацию продолжают еще 30 мин, после чего колбу снимают с нагревателя и дают ей охладиться. Затем в колбу добавляют 100-150 см дистиллированной воды и содержимое колбы перемешивают.

8.3.2 Отгонка аммиака

Отгонку аммиака проводят в приборе, изображенном на рисунке 1. Допускается проводить отгонку аммиака с водяным паром в приборе, изображенном на рисунке 2. В этом случае в парообразователь наливают водопроводную воду, которую подкисляют серной кислотой, чтобы исключить выделение из нее имеющегося аммиака.

Допускается для отгонки аммиака применение приборов, изготовленных в соответствии с рисунком 1 из других аналогичных деталей с соединением этих деталей на резиновых пробках и с помощью полиэтиленовых трубок. Конец отгонки аммиака проверяют с помощью индикаторной бумаги.

8.3.2.1 Отгонка аммиака в серную кислоту

Смесь, содержащуюся в колбе Кьельдаля, количественно с помощью дистиллированной воды переносят в колбу прибора для отгонки аммиака. Допускается отгонку аммиака проводить из колбы Кьельдаля вместимостью 500 см. В приемную колбу пипеткой вносят 50 см раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.) и добавляют 5-6 капель индикатора 1 или 2. Собирают прибор. В делительную воронку наливают 100 см раствора гидроокиси натрия с массовой долей 30-40%. Приемную колбу устанавливают так, чтобы удлиненный конец трубки холодильника был погружен в кислоту на глубину 0,5-1 см.

В холодильник пускают воду, включают нагрев и из капельной воронки в колбу осторожно приливают раствор гидроокиси натрия, оставляя в воронке небольшое количество раствора. Капельную воронку промывают два-три раза порциями по 10-15 см дистиллированной воды, которую сливают в колбу, следя за тем, чтобы при каждом сливе, включая последний, в воронке оставалось небольшое количество воды в качестве гидрозатвора.

Допускается прибавлять раствор гидроокиси натрия до присоединения отгонной колбы к аппарату. В этом случае раствор гидроокиси натрия добавляют в отгонную колбу по стенке, стараясь перемешивать его с минерализатом. После добавления всего объема колбу сразу соединяют с аппаратом для отгонки аммиака.

В процессе отгонки аммиака следят за тем, чтобы конец трубки холодильника был погружен в раствор кислоты на 0,5-1 см, но не более. Для этого по мере увеличения объема жидкости в приемной колбе колбу постепенно опускают, что удобно производить с помощью подъемного столика.

Отгонку ведут до тех пор, пока объем раствора в приемной колбе увеличится примерно в три раза, что гарантирует полную отгонку аммиака. По окончании отгонки приемную колбу опускают так, чтобы конец трубки холодильника не касался раствора. Обогрев прекращают, холодильник отсоединяют от каплеуловителя и перегонной колбы и внутреннюю поверхность трубки холодильника, а также ее наружный конец, который был погружен в кислоту, промывают дистиллированной водой из промывалки, давая промывным водам стечь в приемную колбу.

Можно использовать другой прием. Отгонку ведут до тех пор, пока объем жидкости в приемной колбе не увеличится примерно в два с половиной раза, тогда приемную колбу опускают так, чтобы конец трубки холодильника оказался на 2-2,5 см выше уровня жидкости. Отгонку продолжают, отгоняя еще 50-70 см жидкости. Окончание отгонки аммиака проверяют с помощью индикаторной бумаги. Затем конец трубки холодильника, который раньше был погружен в кислоту, промывают снаружи дистиллированной водой из промывалки, давая промывной воде стечь в приемную колбу.

8.3.2.2 Отгонка аммиака в борную кислоту

Отгонку проводят так же, как при отгонке в серную кислоту, с той разницей, что в приемную колбу вносят 50 см раствора борной кислоты с массовой долей 4%. В начале отгонки, когда аммиак начнет поступать в приемную колбу, цвет индикатора принимает зеленую окраску.

8.3.3 Титрометрическое определение аммиака

8.3.3.1 Титрование при отгонке в серную кислоту

Содержимое приемной колбы титруют раствором гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.) до перехода окраски индикатора от фиолетовой в зеленую при применении индикатора 1 и от розовой в зеленую при применении индикатора 2.

8.3.3.2 Титрование при отгонке в борную кислоту

Содержимое колбы титруют раствором серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.) до перехода окраски от зеленой в фиолетовую при применении индикатора 1 и от зеленой в розовую при применении индикатора 2.

8.3.4 Проведение контрольных опытов

Одновременно с рабочим опытом проводят контрольный опыт для определения степени загрязнения воды и реактивов аммиаком. Контрольный опыт повторяет все стадии, исключая взятие навески продукта; его проводят при смене хотя бы одного применяемого реактива, а если реактивы не заменяли, то не реже чем каждые 5 сут.

Контрольный опыт считают удовлетворительным, если при отгонке аммиака в серную кислоту объем раствора гидроокиси натрия, израсходованный на титрование, окажется не менее 45,0 см, а при отгонке аммиака в борную кислоту объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование, окажется более 5,0 см.

При превышении указанных норм выявляют источник загрязнения реактивов аммиаком и устраняют его.

Проводят два параллельных определения.

8.4 Обработка результатов

8.4.1 Массовую долю сырого протеина (X) в процентах при отгонке аммиака в серную кислоту вычисляют по формуле:

,                                        (5)


где V - объем раствора гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.), израсходованный на титрование серной кислоты в контрольном опыте, см;

V - объем раствора серной кислоты, приготовленный из стандарт-титра, взятый для титрования, см;

K - поправка к титру раствора гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.);

0,0014 - масса азота, эквивалентная 1 см раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.);

6,25 - коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю сырого протеина;

m - масса навески продукта, г;

W - массовая доля влаги в испытуемом продукте, %.

8.4.2 Массовую долю сырого протеина (Х) в процентах при отгонке аммиака в борную кислоту вычисляют по формуле:

,                                        (6)


где V - объем раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.), израсходованный на титрование испытуемого раствора, см;

V - объем раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.), израсходованный на титрование в контрольном опыте, см;

K - поправка к титру раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.), если он приготовлен не из стандарт-титра;

0,0014 - масса азота, эквивалентная 1 см раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм (0,1 н.), г;

6,25 - коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю сырого протеина;

m - масса навески продукта, г;

W - массовая доля влаги в испытуемом продукте, %.

Результат округляют до первого десятичного знака. Из результатов двух параллельных определений вычисляют среднее арифметическое значение с тем же числом знаков после запятой и определяют расхождение между каждым результатом и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 1%, округленного до целого числа.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, которое округляют до целого числа.

Допускаемое относительное расхождение между окончательными результатами, полученными в разных условиях (в разных лабораториях, в разное время, при работе с разным оборудованием, с разными материалами и реактивами), вычисляют следующим образом: из окончательных результатов испытаний, полученных в разных условиях, определяют среднее арифметическое значение, которое округляют до целого числа. Далее определяют расхождение между каждым окончательным результатом испытания и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 3%, округленных до целого числа.

     9 Метод определения массовой доли белка по Барнштейну


Сущность метода заключается в удалении из продукта водорастворимых небелковых азотосодержащих соединений при обработке продукта горячей водой, восстановлении азота оставшихся органических соединений при минерализации продукта серной кислотой до аммиака, титрометрическом определении аммиака и пересчете его количества на содержание белка по Барнштейну.

9.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Аппаратура, материалы и реактивы - по п.8.1 и дополнительно:

Воронка В-56-80 ХС, или В-75-110 ХС, или В-75-140 ХС - по ГОСТ 25336.

Стакан В-1-250 ТХС или Н-1-250 ТХС - по ГОСТ 25336.

Колба Кн-2-500-34 ТХС - по ГОСТ 25336.

Фильтр бумажный обеззоленный (синяя лента).

Бумага фильтровальная лабораторная - по ГОСТ 12026.

Натрия гидроокись - по ГОСТ 4328, раствор с массовой долей 2,5%.

Медь сернокислая 5-водная - по ГОСТ 4165, раствор с массовой долей 10%.

Барий хлористый - по ГОСТ 4108, раствор с массовой долей 1-2%.

9.2 Проведение испытания

В химический стакан отвешивают (0,5±0,2) г продукта (результат взвешивания записывают с точностью до четвертого десятичного знака), приливают 100 см кипящей дистиллированной воды. Стакан ставят на нагреватель и кипятят содержимое 2-3 мин. Затем стакан снимают и, не охлаждая жидкости, приливают 20 см раствора сернокислой меди, содержимое перемешивают, добавляют 20 см раствора гидроокиси натрия с массовой долей 2,5%, снова перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 1 ч. Отстоявшуюся жидкость декантируют через фильтр, осадок в стакане промывают горячей водой, декантацией сливая промывные воды через тот же фильтр, затем осадок переносят на фильтр и промывают его горячей водой до исчезновения в промывных водах реакции на сульфат-ион, для чего в пробирку отбирают несколько капель промывных вод и добавляют 2-3 капли раствора хлористого бария; отсутствие помутнения указывает на полноту промывки.

Промытый осадок вместе с фильтром подсушивают на воздухе или в сушильном шкафу при температуре не выше (105±2)°C и помещают в колбу Кьельдаля. Испытание проводят по п.8.3 одним из установленных способов минерализации.

Проводят два параллельных определения.

9.3 Обработка результатов

Обработка результатов - по п.8.4.

Массовую долю белка по Барнштейну (X) в процентах при отгонке аммиака в серную кислоту вычисляют по формуле (5); при отгонке аммиака в борную кислоту - по формуле (6).

     10 Метод определения массовой доли лизина


Сущность метода заключается в кислотном гидролизе белковых веществ продукта до свободных аминокислот с последующим спектрофотометрическим определением окрашенных производных, полученных в результате специфической реакции лизина с фурфуролом в среде ледяной уксусной кислоты.

10.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г - по ГОСТ 22280.

Шкаф сушильный, обеспечивающий постоянство температуры (110±2)°С.

Баня водяная, обеспечивающая постоянство температуры (100±2)°С.

Колбонагреватель любого типа, обеспечивающий постоянство температуры (100±2)°С.

Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр любого типа, обеспечивающий измерение в области 530-545 нм.

Фен или вентилятор комнатный с обогревом любого типа.

Цилиндры мерные 1-1000, 2-100 или 3-100 - по ГОСТ 1770.

Холодильники ХПТ-2-400-29/32 ХС, ХПТ-1-200-14/23 ХС - по ГОСТ 25336.

Колба круглодонная К-1-1000-29/32 ТС или К-1-2000-29/32 ТС, К-1-50-14/23 ТС - по ГОСТ 25336.

Колбы плоскодонные П-1-1000-29/32 ТС и П-1-100-14/23 ТС или конические Кн-1-1000-29/32 ТС и Кн-1-100-14/23 ТС - по ГОСТ 25336.

Колба грушевидная Гр-25-14/23 ТС, или колба остродонная ОГ-2-50-14/23 ТС, или ОГ-3-25-14/23 ТС, или круглодонная К-1-25-14/23 ТС - по ГОСТ 25336.

Трубки хлоркальциевые ТХ-П-2-19, ТХ-П-1-17 - по ГОСТ 25336.

Насадки типа Н1-14/23-14/23-14/23 ТС или Н2-14/23-14/23 ТС - по ГОСТ 25336.

Изгиб U<75° 2К-29/32-14/23 ТС - по ГОСТ 25336.

Алонжи АИО-29/32-29/32-75 ТС, АИО-14/23-14/23-60 ТС - по ГОСТ 25336.

Стаканчики для взвешивания СВ-14/8, или СВ-19/9, или СВ-24/10, или СН-34/12 - по ГОСТ 25336.

Пробирки мерные П-2-15-14/23, П-2-5-14/23 ХС - по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2 или 4-2-2, 5-1-2 или 5-2-2, 6-1-5 или 6-2-5, 7-1-5 или 7-2-5, 6-1-10 или 6-2-10, 7-1-10 или 7-2-10 - по ГОСТ 29227.

Воронка В-36-50 или В-36-80 ХС - по ГОСТ 25336.

Склянка из темного стекла вместимостью 50-100 см с пришлифованной пробкой.

Микрошприц или автоматические пипетки любого типа вместимостью 10-50 мкл или автоматические пипетки вместимостью 10 или 20 мкл.

Бумага индикаторная универсальная.

Фильтры обеззоленные с синей полосой диаметром 8 см.

Бумага фильтровальная - по ГОСТ 12026.

Кислота ледяная уксусная - по ГОСТ 61.

Кислота соляная концентрированная - по ГОСТ 3118, х.ч.

Спирт этиловый ректификованный технический - по ГОСТ 18300 или спирт этиловый абсолютный.

Глицерин - по ГОСТ 6259, ч.

Фурфурол - по ГОСТ 10930 или технический.

Калий пиросернистокислый, ч.

Натрия гидроокись - по ГОСТ 4328, х.ч.

Кальций хлористый обезвоженный, ч.

L-лизин моногидрохлорид, или дигидрохлорид, х.ч.

Кальций оксид (окись кальция) - по ГОСТ 8677, ч.

Вода дистиллированная.

10.2 Подготовка к испытанию

10.2.1 Приготовление абсолютированного спирта

В круглодонную колбу вместимостью 2 дм наливают 1 дм этилового спирта и помещают 250 г оксида кальция. Смесь кипятят в течение 10 ч с обратным холодильником, закрытым хлоркальциевой трубкой с хлористым кальцием. Кипячение допускается проводить в два приема с перерывом на ночь. На время перерыва прибор не разбирают, оставляя его закрытым хлоркальциевой трубкой. После окончания кипячения нагреватель оставляют, прибор не разбирают и дают ему охладиться. Далее колбу со спиртом через изгиб соединяют с установкой для перегонки, состоящей из прямого холодильника, алонжа и приемной колбы; к свободному концу алонжа присоединяют хлоркальциевую трубку с хлористым кальцием.

Отгонку проводят до тех пор, пока в приемную колбу не отгонится 0,7 дм спирта. Далее приемник заменяют и отгоняют оставшийся спирт.

Первый отгон - абсолютированный спирт - хранят в сосуде с закрытой пробкой.

Допускается абсолютирование спирта проводить другими способами, установленными в нормативно-технической документации.

10.2.2 Перегонка фурфурола в вакууме

Перегонку осуществляют в приборе, состоящем из грушевидной или остродонной, или круглодонной колбы холодильника, алонжа и приемной круглодонной колбы. Во избежание выбросов в прямое горло колбы на резиновой пробке вводится стеклянная трубка с оттянутым в капилляр концом, доходящим почти до конца дна колбы. На выходящий из пробки наружный конец трубки надевается кусок резиновой трубки, через которую вводится небольшой кусок нитки или тонкой проволоки. Резиновая трубка пережимается винтовым зажимом, которым во время отгонки регулируют поступление в колбу через капилляр пузырьков воздуха. Пузырьки воздуха во время отгонки должны выходить из капилляра и подниматься в виде цепочки отдельных мелких пузырьков. Второе горло отгонной колбы закрывают пришлифованной пробкой. Отгонку ведут под вакуумом водоструйного насоса на водяной бане при температуре 60-70°C или на колбонагревателе при температуре не выше 95°C.

При абсолютировании спирта, его разгонке и перегонке фурфурола в вакууме допускается сборка приборов из других элементов.

10.2.3 Приготовление фурфурольного реактива

В стаканчик для взвешивания (бюксу) отвешивают (0,065±0,005) г пиросернистокислого калия (результат взвешивания записывают с точностью до четвертого десятичного знака). Навеску возможно более полно пересыпают в коническую или плоскодонную колбу вместимостью 100 см с пришлифованной пробкой. Количество пиросернистокислого калия не должно быть точным, поэтому второе взвешивание стаканчика и определение точной массы соли по разности между взвешиваниями не производят.

В колбу добавляют 40 см ледяной уксусной кислоты, дают соли раствориться, добавляют 30 см абсолютированного или абсолютного этилового спирта и 10 см свежеперегнанного фурфурола или фурфурола перегнанного, хранящегося в запаянных вакуумированных ампулах.

Раствор перемешивают.

Приготовленный реактив хранят в холодильнике не более 2 нед.

10.2.4 Приготовление водного раствора глицерина

В стеклянной колбе или склянке с пришлифованной пробкой смешивают один объем глицерина с четырьмя объемами дистиллированной воды.

Раствор хранят в холодильнике 2 мес.

10.2.5 Приготовление раствора соляной кислоты концентрации с(НСl)=6 моль/дм (6 н.)

В стеклянной колбе или склянке с пришлифованной пробкой смешивают соответствующие в зависимости от плотности концентрированной соляной кислоты объемы этой кислоты и дистиллированной воды.

10.2.6 Приготовление раствора гидроокиси натрия концентрации с(NaOH)=6 моль/дм (6 н.)

В фарфоровый сосуд отвешивают гидроокись натрия и добавляют дистиллированную воду. После растворения гидроокиси натрия раствор охлаждают и переливают в мерную колбу. Затем к раствору порциями добавляют дистиллированную воду, постепенно доводя объем раствора до метки. После добавления каждой порции раствор перемешивают и, если произошло нагревание, раствору дают охладиться. Для получения 250 см раствора берут 60 г гидроокиси натрия и 200 см дистиллированной воды. Для получения других объемов раствора гидроокиси натрия концентрации c(NaOH)=6 моль/дм (6 н.) количество гидроокиси натрия и воды рассчитывают.

10.2.7 Приготовление стандартных растворов лизина

10.2.7.1 Раствор, содержащий 2,5 мг/см лизина

В стаканчик для взвешивания отвешивают (0,078±0,001) г монохлорида лизина или соответствующее количество дигидрохлорида (результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака). Навеску соли количественно переносят дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 25 см, монохлориду дают раствориться, раствор в колбе доводят до метки 25 см дистиллированной водой и перемешивают.

10.2.7.2 Раствор Б, содержащий 1,0 мг/см лизина

От раствора А пипеткой вместимостью 10 см отбирают 10 см раствора, переносят в мерную колбу вместимостью 25 см, доводят дистиллированной водой до метки 25 см и перемешивают.

Стандартные растворы лизина хранят в холодильнике не более месяца.

10.2.8 Построение градуировочного графика

Из листа фильтровальной бумаги вырезают шесть полосок длиной 5 см и шириной 0,5 см, которые нумеруют карандашом.

На полоски примерно на середине микрошприцем или автоматической пипеткой наносят капли растворов: на первую полоску - 10 мкл раствора Б, на вторую - 20 мкл раствора Б, на третью - 10 мкл раствора А, на четвертую - по 10 мкл растворов А и Б, на пятую - 20 мкл раствора А и на шестую - 20 мкл дистиллированной воды. После нанесения растворов и воды полоски по очереди берут пинцетом и сушат в токе теплого воздуха.

Количество лизина на полосках фильтровальной бумаги должно соответствовать указанному в таблице.

Номер полоски

Количество лизина, мкг

1

10

2

20

3

25

4

35

5

50

6

0


Для построения градуировочного графика допускается использование и других количеств лизина.

Участок бумаги, занятый пробой, вырезают и помещают в пробирки вместимостью 5 см с пришлифованными пробками. Затем в каждую пробирку добавляют пипеткой 1,2 см фурфурольного реактива, пробирки плотно закрывают пробками, помещают в водяную баню, предварительно нагретую до 95°C, и выдерживают при этой температуре в течение 40 мин. Затем пробирки вынимают из бани, быстро охлаждают, опустив пробирки в баню с холодной водой или помещая их под струю воды из водопровода. После охлаждения сразу в каждую пробирку пипеткой приливают по 2 см раствора глицерина и содержимое пробирок тщательно перемешивают.

Далее раствор спектрофотометрируют, измеряя поглощение света на длине волны 540 нм в кюветах с длиной поглощающего слоя 5 мм. В кювету сравнения наливают раствор, приготовленный, как раствор 6, но без помещения в пробирку фильтровальной бумаги.

Для каждого количества лизина готовят две параллельные пробы.

За окончательный результат величины оптической плотности каждого раствора лизина принимают среднюю арифметическую величину двух параллельных определений, значения которых не должны отличаться от средней величины более чем на 5%, рассчитанных до целого числа.

По полученным данным строят градуировочный график, откладывая по оси ординат показатели оптической плотности, а по оси абсцисс - содержание лизина в микрограммах.

10.3 Проведение испытания

В грушевидную колбу отвешивают 0,2-0,3 г продукта (результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака). Пипеткой приливают 5 см раствора соляной кислоты концентрации 6 моль/дм (6 н.). Колбу плотно закрывают пришлифованной пробкой и помещают в сушильный шкаф, предварительно нагретый до температуры (110±2)°C, и выдерживают при этой температуре 18 ч. Через 1 ч колбу вынимают, просматривают и, если в реакционной смеси заметны комочки, их разбивают встряхиванием колбы и снова ставят в сушильный шкаф.

Через 18 ч колбу вынимают и охлаждают. Затем доводят рН раствора по универсальной индикаторной бумаге до 4-5, добавляя необходимое количество раствора гидроокиси натрия концентрации 6 моль/дм (6 н.).

Гидролизат фильтруют через бумажный фильтр в мерную пробирку вместимостью 15 см. Реакционную колбу обмывают 4 см дистиллированной воды (двумя порциями по 2 см), большим количеством дистиллированной воды (1-2 см) и этой же водой промывают осадок на фильтре. Раствор тщательно перемешивают и измеряют объем полученного раствора гидролизата.

Микрошприцем или автоматической пипеткой на полоску фильтровальной бумаги размером 50,5 см наносят 20 мкл полученного раствора гидролизата. Полоску высушивают в токе теплого воздуха. Участок бумаги, занятый раствором гидролизата, вырезают, помещают в пробирки вместимостью 5 см с пришлифованной пробкой и проводят определение по п.10.2.8.

Содержание лизина в растворе гидролизата определяют по калибровочному графику.

Проводят два параллельных определения.

10.4 Обработка результатов

Массовую долю лизина (X) в процентах вычисляют по формуле:

,                                              (7)


где A - количество лизина в растворе гидролизата, найденное по калибровочному графику, мкг;

V - объем полученного раствора гидролизата, см;

m - масса навески продукта, г;

20 - объем раствора гидролизата, взятый на определение, мкл;

W - массовая доля влаги в продукте, %.

Результат округляют до второго десятичного знака. Из результатов двух параллельных определений вычисляют среднее арифметическое значение с тем же числом знаков после запятой и определяют расхождение между каждым результатом и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 10%, округленных до целого числа. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, которое округляют до первого десятичного знака.

Допускаемое относительное расхождение между окончательными результатами, полученными в разных условиях (в разных лабораториях, в разное время, при работе с разным оборудованием, с разными материалами и реактивами), вычисляют следующим образом: из окончательных результатов испытаний, полученных в разных условиях, определяют среднее арифметическое значение, которое округляют до первого десятичного знака. Далее определяют расхождение между каждым окончательным результатом испытания и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 20%, округленных до целого числа.

     11 Метод определения массовой доли липидов


Сущность метода заключается в экстракции липидов смесью органических растворителей из продукта, обработанного раствором соляной кислоты при нагревании, гравиметрическом определении суммы экстрагированных веществ после удаления растворителя.

11.1 Аппаратура и реактивы

Весы лабораторные технические любого типа.

Весы лабораторные 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 1 кг - по ГОСТ 22280.

Баня водяная, обеспечивающая постоянство температуры (75±2)°C.

Шкаф сушильный, обеспечивающий постоянство температуры (105±2)°C.

Испаритель ротационный ИР-1М или другой марки.

Насос водоструйный лабораторный.

Колба К-1-100-29/32 ТХС, или К-1-250-29/32 ТХС, или П-1-100-29/32 ТХС, или Кн-1-100-29/32 ТХС - по ГОСТ 25336.

Холодильник ХПТ-2-400-29/32 ХС, или ХШ-1-300-29/32 ХС, или ХШ-1-400-29/32 ХС - по ГОСТ 25336.

Воронка делительная ВД-1-100 ХС, или ВД-3-100 ХС, или ВД-1-250 ХС, или ВД-3-250 ХС - по ГОСТ 25336.

Цилиндр мерный 1-50 или 3-50 - по ГОСТ 1770.

4 закупки
Свободные
Р
Заблокированные
Р
Роль в компании Пользователь

Для продолжения необходимо войти в систему

После входа Вам также будет доступно:
  • Автоматическая проверка недействующих стандартов в закупке
  • Создание шаблона поиска
  • Добавление закупок в Избранное